核心结合因子α1过表达慢病毒载体的构建及鉴定
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曹金芳 李伟宏 邓辉 王惠宁 温州医学院附属口腔医院口腔内科;
【摘要】目的构建含人CBFα1/RUNX2基因的过表达慢病毒载体。方法采用PCR技术体外扩增人CBFα1/RUNX2,将扩增产物与慢病毒载体pGC-FU连接,构建重组质粒pGC-FU-hCBFα1/RUNX2,并进行酶切及测序鉴定。鉴定正确的克隆转染293T细胞,经荧光显微镜观察和Western Blot检测hCBFα1/RUNX2基因在293T细胞内的瞬时表达。再利用脂质体转染法将pGC-FU-hCBFα1/RUNX2、pHelper1.0和pHelper2.0三质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,并通过实时荧光定量PCR检测病毒滴度。结果重组质粒经测序证实,插入片段与人CBFα1/RUNX2基因序列完全一致。荧光显微镜观察以及Western Blot印迹均证实pGC-FU-hCBFα1/RUNX2中携有正确的hCBFα1/RUNX2基因,并能在293T细胞中瞬时表达。包装慢病毒后实时荧光定量PCR检测病毒滴度为(2.00×108)TU/mL。结论成功构建了携带hCBFα1/RUNX2基因的重组慢病毒载体,为进一步研究其在牙周组织再生中的生物学功能奠定了基础。
【关键词】 CBFα/RUNX 慢病毒载体 转染
【基金】浙江省温州市科技局资助项目(编号:Y20070052) 浙江省教育厅资助项目(编号:20070914)
【分类号】Q78
安全有效的牙周组织再生疗法一直是牙周领域研究的热点,但是现有的治疗方法都存在各自的缺陷。由于基因治疗和组织工程技术的联合应用模仿了牙周组织的自然发育过程,因此在牙周组织再生中已有不少研究。基因治疗首要的问题是选择用于治疗的目的基因。核心结合因子α1(core bin
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