MTA1基因对宫颈癌细胞HeLa侵袭转移的影响(2)
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1.2.4细胞划痕实验转染48h后，将生长状态良好的细胞接种于6孔培养板中，待细胞长到完全融合时，用200μL黄色枪头在6孔板的底面上沿直线轻轻进行划痕，PBS冲洗2次后继续培养，分别与8h、16h后在倒置显微镜下观察细胞划痕愈合情况并照相，以细胞划痕愈合百分比表示细胞的运动能力(0h的细胞划痕愈合为0%)。
1.2.5Transwell小室体外侵袭实验将Transwell小室置于24孔板内，每个孔下室内加入10%小牛血清的DMEM培养液500μL，上室加入200μL细胞悬液，每组设5个复孔，常规培养12h。取出Transwell小室，95%乙醇固定，棉拭子擦去小室内面的基质胶，4%多聚甲醛固定，HE染色，显微镜下观察并照相。
1.3统计学处理
实验数据均经SPSS13.0统计软件处理，结果以(χ±s)表示，两组之间均数的比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1转染pEGFP-C1/MTA1后MTA1蛋白表达的改变
转染后，pEGFP-C1/MTA1组MTA1蛋白的表达明显高于pEGFP-C1组及对照组(P<0.05)，pEGFP-C1组和对照组的差异无统计学意义(P>0.05)(图1)。各组的相对表达量见表1。
2.2细胞黏附能力检测
细胞黏附能力实验结果显示细胞种植30min后黏附率pEGFP-C1/MTA1组明显高于pEGFP-C1组及对照组(P<0.05)，pEGFP-C1组和对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。各组细胞种植30min后黏附率见表1。
2.3单层细胞划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力
单层细胞受伤的24h内只能靠细胞的移动来愈合，所以单层细胞划痕实验可以反映细胞的迁移能力。单层细胞划痕实验显示，pEGFP-C1/MTA1组细胞的迁移速度明显快于pEGFP-C1组及对照组(P<0.05)，pEGFP-C1组和对照组的差异无统计学意义(P>0.05)(图2)。各组细胞的划痕愈合百分比见表1。
2.4细胞侵袭能力的比较
Matrigel胶能在聚碳酸酯微孔滤膜表面形成类似基底膜的结果，所以细胞穿过Matrigel的情况可以反映出肿瘤细胞的侵袭能力。Transwell侵袭小室实验结果显示，pEGFP-C1/MTA1组穿膜细胞数明显多于pEGFP-C1组及对照组(P<0.05)，pEGFP-C1组和对照组的差异无统计学意义(P>0.05)(图3)。各组的穿膜细胞数见表1。
注：MTA1蛋白的表达：pEGFP-C1组与pEGFP-C1/MTA1组比较t=2.087，P<0.05，对照组与pEGFP-C1/MTA1组比较t=2.081，P<0.05；细胞黏附率：pEGFP-C1组与pEGFP-C1/MTA1组比较t=1.067，P<0.05，对照组与pEGFP-C1/MTA1组比较 t=1.054，P<0.05；细胞划痕愈合百分比：pEGFP-C1组与pEGFP-C1/MTA1组比较t=2.101，P<0.05，对照组与pEGFP-C1/MTA1组比较t=2.091，P<0.05；穿膜细胞数：pEGFP-C1组与pEGFP-C1/MTA1组比较t=1.661，P<0.05，对照组与pEGFP-C1/MTA1组比较 t=1.597，P<0.05
3讨论
MTA1基因是Toh等运用差异cDNA文库扫描技术从高转移大鼠乳腺腺癌细胞系中发现的，随后用同源的方法发现了人的MTA1基因。除睾丸外的正常组织中，如心脏、肝脏、脑、肺脏、肾脏中MTA1都呈低水平表达，说明MTA1基因参与了正常细胞的增殖过程。近年来研究发现，MTA1在多种恶性肿瘤组织中过表达，并且过表达的癌组织具有明显的高侵袭率和淋巴结转移率，容易发生血行转移[5，6]。符丽华等[7]运用RT-PCR检测了53例新鲜宫颈癌组织标本，发现宫颈癌组织MTA1 mRNA表达量明显增高，并且与宫颈癌的临床分期及转移有关。但是目前在分子水平有关MTA1与宫颈癌细胞转移浸润的研究鲜有报道。
本实验选取了宫颈癌HeLa细胞为研究对象，对其转入全长正义MTA1质粒进行干预，结果发现pEGFP-C1/MTA1组MTA1蛋白的表达较pEGFP-C1组和对照组明显增强，并且pEGFP-C1/MTA1组较pEGFP-C1组和对照组细胞黏附率高、划痕愈合能力强、穿膜细胞数多，说明pEGFP-C1/MTA1组在异质间黏附能力、侵袭转移能力方面均明显增强，这与MTA1在其他恶性肿瘤中的研究结果一致。目前MTA1增强肿瘤细胞侵袭转移能力的具体机制尚不明确，但是明确的是MTA1蛋白能够与组蛋白去乙酰化酶结合，去除组蛋白的乙酰基从而重塑染色质的结构，因此MTA1能够直接或者间接地作用于某些抑制肿瘤浸润转移的基因，下调其转录从而促进肿瘤的浸润转移。
本研究中我们证实了MTA1与宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移能力的关系，为宫颈癌分子转移机制提出了理论依据，并且为宫颈癌的靶向治疗提供了新的参考靶点。
[参考文献]
[1] 顾晓梅，张玉泉. 宫颈癌的流行病学高危因素研究进展[J]. 中国妇幼保健，2007，22(35)：5073-5075.
[2] Long HJ 3rd. Management of metastatic cervical cancer：review of the literature[J]. J Clin Oncol，2007 ......
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