二十碳五烯酸抑制肺腺癌A-549细胞株增殖(2)
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参见附件。
1.3 细胞检测
①形态学观察：PBS洗涤，95%乙醇固定，常规HE染色，观察细胞形态变化[9]。②细胞生长抑制率计算：采用MTT法测定各组细胞的生长抑制情况[10，11]。计算各组细胞生长抑制率及药物半数抑制浓度(IC50)。③细胞凋亡指数(AI)：细胞用4%多聚甲醛固定后，用TUNEL法检测各组细胞凋亡情况。随机选取10个高倍视野，分别计数细胞总数及凋亡细胞数。AI＝凋亡细胞数/细胞总数×100%。
1.4 流式细胞术检测
取对数生长期细胞，置入培养瓶中，贴壁后分别加入各组药物，48h后用Annexin V-FITC和溴化丙啶(propidium iodide，PI)后上机检测。
1.5 统计学处理
采用SPSS17.0统计软件对数据进行单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组A-549细胞形态
光镜下，A组细胞生长旺盛，核分裂多见，核质染色均匀；B组细胞缩小，核质浓缩，部分细胞凋亡。倒置显微镜下，A组细胞贴壁生长良好，透光度佳；B组细胞变小，染色质凝集，透亮度差，贴壁能力差，生长明显受抑。见图1～4。
2.2 各组A-549细胞生长抑制率及72h时AI比较
见表1。
2.3 流式细胞检测
对照组细胞G0/G1期分布多，药物组出现典型凋亡峰，S期细胞增多，随药物剂量的增加及时间延长而增加，提示药物联合组细胞受阻于S期。
3 讨论
在抗肿瘤药物作用和细胞凋亡的研究中，多数抗肿瘤药物作用于肿瘤细胞增殖的不同时期，从而诱导细胞死亡。但是抗肿瘤药物在杀伤肿瘤细胞的同时，会对正常的组织细胞带来损伤[12]。
既往的研究提示，EPA能明显抑制肿瘤的发生、生长和转移速度，对防治肺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌和子宫癌等有积极作用，其抗癌的主要机制：抑制起源于花生四烯酸(AA)的花生酸类的生物合成，影响转录因子的活性、基因表达、信号的转录，增强免疫，脂质过氧化[13-15]，清除自由基，修复损伤的细胞DNA[16]，避免损伤细胞凋亡或突变为肿瘤细胞。顺铂系铂的金属络合物，作用类似于烷化剂，主要作用靶点为细胞DNA，作用于DNA链间及链内交链，形成DDP-DNA复合物，干扰DNA复制或与核蛋白及胞浆蛋白结合，属于细胞周期非特异性药物[17，18]。
本研究表明，EPA对肺腺癌A-549细胞具有抑制增殖作用和诱导细胞凋亡作用，在HE染色后光镜和倒置显微镜观察，添加EPA的实验组细胞呈现明显凋亡改变，从形态学上证明了EPA具有诱导细胞凋亡的作用。添加EPA和顺铂的实验组比单纯添加顺铂组抑制A-549细胞的作用更明显，同时实验显示，随着EPA剂量的增加，其抑制细胞增殖及诱导凋亡作用明显增强，细胞被阻止在S期，进一步证实了EPA联合顺铂对A-549细胞的作用呈量效关系，并具有时间依赖性。
总之，在体外实验中，EPA对人肺腺癌A-549细胞株有生长抑制作用，并呈现时间与量效关系，联合顺铂对细胞株作用更明显。其抑制肿瘤细胞机制可能为影响A-549细胞株的转录因子活性，联合顺铂改变A-549细胞株增殖过程中的基因表达，转录信号调控，干扰肿瘤细胞的DNA复制等。通过上次[9]和本次实验，我们认为EPA有望成为新型抗肿瘤药物，联合顺铂等传统抗肿瘤药物，在序贯治疗肺腺癌中很有前景。下一步的研究将主要为EPA联合其他抗肿瘤药物作用于肺腺癌A-549细胞株的研究，EPA抗肿瘤作用的最佳剂量以及EPA联合每一种抗肿瘤药物的最佳生物结合率等。
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[7] 黄海辉，胡绍毅，边志衡，等. 两种体外培养条件下肺腺癌A549细胞生物学特性的变化[J]. 解放军医学杂志 ......
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