HSP60对小鼠树突状细胞迁移动脉粥样斑块的影响(2)
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1.6 DC体内迁移实验
将三组DC细胞密度调整为1×106 cells/mL，ApoE-/-小鼠持续高脂饮食，形成动脉粥样硬化斑块后，皮下接种各组DC约0.2mL，每周1次，共3次。最后1次DC细胞接种3d后，予10%乌拉坦麻醉后断颈处死小鼠，剥去主动脉，剔除血管外膜，制成冰冻切片后，予CD80-PE抗体染色后在Olympus荧光显微镜下观察，随机连续取5个视野计数斑块中细胞。
1.7 统计学处理
使用SPSS15.0统计软件进行分析。数据用均数±标准差(χ±s)表示，统计学方法采用方差分析，组间比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 细胞表型检测
三组的DC用FASC分析其表型CD80及MHCⅡ。结果显示，与NS组相比，HSP60组和LPS组的CD80及MHCⅡ表达显著增高(t=7.14，P=0.002；t=4.29，P=0.010)，但HSP60组和LPS组之间CD80及MHCⅡ表达未见差异(t=1.26，P=0.314)。见表1。
2.2 DC细胞迁移活性变化
体外迁移实验结果显示：与NS组相比，HSP60组和LPS组的迁移到滤膜下层面的DC数目显著增加(t=4.02，P=0.009；t=2.95，P=0.016)，但HSP60组和LPS组之间无显著性差异(t=1.82，P=0.054)。体内迁移实验结果显示：与NS组相比，LPS组及HSP60组的迁移到主动脉粥样斑块的DC数目显著增加(t=5.09，P=0.042；t=8.12，P=0.001)，但HSP60组和LPS组之间无显著性差异(t=1.04，P=0.088)。见表2。
3 讨论
目前已经广泛公认，动脉粥样硬化是一种慢性免疫炎性疾病，而免疫炎性反应是动脉粥样硬化斑块形成的第一步，同时也是动脉粥样斑块破裂的重要原因之一[5]。目前认为DC作为体内最强的抗原提呈细胞，是免疫炎性反应启动及发展的关键[6]。而DC存在于胸腺等免疫器官，动脉内膜理论上并不是DC的常规存在部位，故了解DC如何从免疫器官迁移至动脉粥样斑块局部就尤其显得重要。
免疫细胞的迁移多以目标抗原的存在为靶向，目前认为CRP、ox-LDL、HSP60等自身抗原诱发DC成熟，其中HSP60是近来最为重视的抗原[7]。HSP60作为进化上高度保守的分子伴侣，广泛存在于生物体内。目前认为细菌与人的HSP存在高度同源性，因而某些细菌感染后，DC细胞提呈细菌HSP65于T淋巴细胞所产生的抗体与人HSP60可能存在交叉反应，这已在多个研究中得到证实[3]。目前临床发现动脉粥样硬化患者体内存在HSP60抗体及HSP60特异性的T细胞[8]，说明HSP60与动脉粥样硬化斑块形成密切相关。因而本研究选取HSP60作为目标抗原，研究HSP60能否促使DC迁移到动脉粥样硬化斑块局部，启动免疫炎症反应。
本研究中使用的实验动物为ApoE基因敲除小鼠，此小鼠予以高脂饮食即可形成动脉粥样硬化斑块，故是良好的动脉粥样硬化斑块动物模型。研究中通过比较HSP60、LPS和NS三种物质，发现HSP60可以上调DC的表面表型，以及体外和体内促使DC迁移，且HSP60可以定向诱导DC迁移至动脉粥样硬化斑块局部。这一发现为临床更好预防冠心病发生及减少急性冠脉综合征的发作提供了新的途径。
[参考文献]
[1] Banchereau J，Steinman RM. Dendritic cells and the control of immunity[J]. Nature，1998，392(6673)：245-252.
[2] Yilmaz A，Lochno M，Traeg F，et al. Emergence of dendritic cells in rupture-prone regions of vulnerable carotid plaques[J]. Atherosclerosis，2004，176(1)：101-110.
[3] Mandal K，Jahangiri M，Xu Q. Autoimmunity to heat shock proteins in atherosclerosis[J]. Autoimmun Rev，2004，3(2)：31-37.
[4] Inaba K，Inaba M ......
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