PCNA、Caspase-3和Bcl-2在不同类型IgA肾病中的表达及意义(2)
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[Key words] IgA nephropathy; Apoptosis; PCNA; Caspase-3; Bcl-2
IgA肾病(IgA nephropathy，IgAN)是一组以肾小球系膜区IgA沉积、同时伴系膜细胞增生和系膜基质扩张为主要病理改变的原发性肾小球肾炎。研究表明，不同病理学类型IgAN由于病理改变不同，表现出的细胞凋亡与增殖不同，凋亡机制的反应性存在着明显的差异[1]。但PCNA、Caspase-3和Bcl-2与不同类型IgAN关系的研究报道较少。本研究观察PCNA、Caspase-3和Bcl-2在不同病理类型IgA肾病的变化，并探讨其意义及与患者肾功能临床指标间的关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象
54例IgAN患者肾活检标本均选自山西医科大学第二医院病理科2006年7月～2010年7月病理科存档资料。其中男38例，女16例，平均年龄31.5岁。均除外紫癜性肾炎、狼疮肾炎、乙肝病毒相关性肾炎及肝病性肾小球硬化症等继发性肾病。所有标本均行光镜、直接免疫荧光和透射电镜检查。光镜经常规石蜡组织切片，行苏木素-伊红(HE)、过碘酸雪夫反应(PAS)、过碘酸六胺银染色(PASM)及马松染色(Masson)，直接免疫荧光检查采用OCT 包埋，冰冻切片观察IgG、IgM、IgA、C3、C1q、FRA；电镜检查经戊二醛固定，制作切片并观察。按照1997年Hass分级标准对IgAN进行病理组织学分级：轻微病变型(Ⅰ级)9例；局灶节段性肾小球硬化样型(Ⅱ级)12例；局灶增生型(Ⅲ级)12例；弥漫增生型(Ⅳ级)11例；进行性慢性肾炎型(Ⅴ级)10例。
1.2 实验方法
1.2.1 肾组织PCNA、Caspase-3和Bcl-2的检测 将存档的石蜡包埋标本常规制片，采用免疫组化染色二步法染色。每例切片随机选取5个200倍视野下分析，所有经免疫组化染色的结果用Image-Pro plus(IPP)图像处理系统测定肾小球Caspase-3、Bcl-2的平均光密度，以反映Caspase-3、Bcl-2的表达量。PCNA的表达情况用球内阳性胞数/总细胞数(%)表示。PCNA、Caspase-3和Bcl-2抗体均购于武汉博士德生物技术开发有限公司，增强剂、二抗、DAB显色试剂盒购于福州迈新生物技术开发有限公司。
1.2.2 临床指标的检测 包括Scr、BUN、24 h尿蛋白定量。
1.3 统计学处理
实验测定值计量资料以(x±s)表示，多组间比较用单因素方差分析(ANOVA)，组间两两比较用Bonferroni法。各指标间相关性采用Spearson相关性分析。全部数据应用SPSS 13.0软件包分析， P < 0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 不同病理学类型IgA肾病中PCNA、Caspase-3和Bcl-2的表达
见表1。表1显示，PCNA、Caspase-3在Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级间均有统计学意义(均P < 0.01)。Bcl-2在Ⅰ级、Ⅱ级与Ⅲ～Ⅴ级间差异有统计学意义(均P < 0.01)。在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级的三种蛋白表达间也均有统计学意义(P < 0.01)。IgAN肾组织内PCNA、Caspase-3和Bcl-2均主要表达于肾小球系膜细胞和内皮细胞。PCNA为细胞核阳性，Caspase-3阳性部位为细胞核或细胞浆，Bcl-2阳性定位于细胞浆。
2.2 不同病理学类型IgA肾病临床指标的比较
见表2。表2显示，Scr在Ⅴ级的水平与其他各级间均有统计学意义(P < 0.01)；BUN在Ⅴ级的水平与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级间均有统计学意义(P < 0.01)；24 h尿蛋白定量在Ⅰ级的水平与其他各组间及在Ⅴ级与Ⅱ、Ⅲ级间均有统计学意义(P < 0.01)。
2.3 三种蛋白及肾功能临床指标间的相关性
见表3。表3显示 PCNA、Caspase-3和Bcl-2的表达与Scr、BUN、24 h尿蛋白定量间均呈正相关。
2.4 PCNA、Caspase-3、Bcl-2表达之间的相关性
见表4。表4显示，PCNA的表达与Caspase-3呈正相关。
3 讨论
增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是反映细胞增殖活性的一项良好指标，它与DNA聚合酶δ结合，以引导完成DNA的复制[2]，其存在直接表明细胞处于增殖周期，从而有助于了解各种肾脏疾病的发病过程。
Sebo等[3]认为肾小球增殖指数与肾小球组织病变程度有关。本研究结果显示，在轻微病变型(Ⅰ级)PCNA表达较少，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级其表达逐渐增多，而到进行性慢性肾炎型(Ⅴ级)由于过度的增殖导致纤维化和瘢痕形成，肾小球细胞增殖能力减弱，其表达又明显减少，提示IgAN肾小球细胞增殖程度随肾脏病变加重进行性增加。这与Sebo的观点类似。
Caspase-3是细胞凋亡的关键执行者[4]。大多数触发细胞凋亡的因素最终均需要通过Caspase-3介导的信号传导途径导致细胞凋亡[5]。本研究结果显示，Caspase-3随着病变程度加重，其表达逐渐增高，Ⅰ级与其他各级间均有统计学意义(P <0.01)。Caspase-3的表达与Scr、BUN、24 h尿蛋白定量均呈正相关(P < 0.01)，与PCNA的表达也呈正相关，表明Caspase-3可能参与了IgAN的凋亡过程，且随着病变加重、肾功能降低、肾小球系膜细胞和内皮细胞增殖增多，其触发凋亡的作用也逐渐增强，以平衡肾小球细胞数，防止肾小球细胞过度增殖。
Bcl-2是Bcl-2蛋白质家族中抗凋亡的成员之一，研究认为，Bcl-2 可通过抑制内源性核酸内切酶活性，阻止细胞色素C、黄素蛋白(AIF)从线粒体释放入细胞质，使凋亡效应蛋白酶链 Caspase-3 不能激活以及抗氧化活性等机制发挥抑制的凋亡作用[6]。本研究结果显示，Bcl-2的表达从Ⅰ级到Ⅴ级逐渐增高 ......
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