抵抗素基因单核苷酸多态性与2型糖尿病的相关性研究(1)
[摘要] 目的 探讨抵抗素基因rs34861192单核苷酸多态性与2型糖尿病的关系。 方法 分别测定2型糖尿病组(T2DM组)100例及正常对照组(CON组)150例空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FIN)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-CH)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CH)和抵抗素，并计算胰岛素抵抗指数(IRI)；同时采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对T2DM组和CON组进行抵抗素rs34861192位点基因型的检测，根据结果进行综合分析。 结果 T2DM 患者FBG、FIN、IRI、TG、抵抗素的检测数值[分别为(9.96±5.86) mmol/mL，(12.23±9.21) μg/mL，6.25±4.13，(2.02±1.85) mmol/mL，(7.24±3.65) ng/mL]高于健康人群的检测数值[分别为(4.94±0.50) mmol/mL，(5.63±2.66) μg/mL，1.24±0.62，(1.33±0.74) mmol/mL，(1.44±0.93) ng/mL]，差异有统计学意义(t值 分别为8.535，4.586，4.936，3.516，15.524，P均<0.05)；T2DM组和CON组抵抗素rs34861192位点的基因型分布分别为AA6%、AG40%、GG54%和 AA 0.7%、AG20%、GG79.3%；抵抗素基因rs34861192位点的基因型分布和等位基因频率在T2DM组和CON组间有统计学意义(χ2值分别为20.231、19.103，P均<0.05)。 结论 抵抗素可能是T2DM的危险因子，抵抗素基因rs34861192位点多态性与2型糖尿病相关，同时可能对脂代谢有一定影响。
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[关键词] 抵抗素；基因多态性；2型糖尿病
[中图分类号] R541 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)21-0048-04
人的抵抗素基因存在多种单核苷酸多态性(SNP)现象，而SNP与2型糖尿病间的相关性，目前并无统一定论，可能与研究样本的数量、病例及位点的选取有关，更可能与不同种族间的糖尿病易感性及个体差异有关。我们研究抵抗素水平和抵抗素基因rs34861192位点多态性与T2DM的关系，分析此抵抗素基因是否为2型糖尿病的易感基因，为2型糖尿病的早期预测、诊断、治疗及预后提供分子生物学依据。
1材料与方法
1.1材料
仪器与试剂 ① 实验仪器：质谱检测仪(MassARRAY Analyzer Compact)，点样仪(MassARRAY Nanodispenser)，384 孔双头 PCR 仪(GeneAmp PCR System 9700 Dual 384-Well Sample Block Module)，6mg 384纯化板(SEQUENOM 公司)，STAR全自动样本工作站和FAME全自动酶标分析仪，罗氏cobase 411 全自动电化学发光免疫分析仪。 ② 主要试剂：通用基因组DNA提取试剂盒(广州市达晖生物技术有限公司)，iPLEX PCR反应试剂盒(SEQUENOM 公司)，384-well SpectroCHIP 生物芯片(SEQUENOM 公司)，HOTSTART Taq酶(SEQUENOM 公司)，虾碱性磷酸酶(SAP酶，SEQUENOM 公司)，阳离子交换树脂(SEQUENOM 公司)，阳性质控YH(深圳华大基因研究院培育的“炎黄一号”细胞株DNA)，抵抗素(RapidBio Lab Calabasaa)，胰岛素(Abbott Japan CO，LTD)，葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯(中生北控生物科技股份有限公司)，高密度脂蛋白胆固醇(日本第一化学药品株式会社)，低密度脂蛋白胆固醇(DiaSys Diagnostie Systems GmbH，德赛)。
, 百拇医药
1.2 对象
(1)正常对照组(CON组)：健康体检的150例个体，无T2DM(均检测空腹及餐后2 h血糖)，无冠心病(无主述史并且心电图无异常)，体重指数(body mass index，BMI)<25 kg/m2。(2)T2DM组：新诊断的T2DM患者100例(符合1999年WHO糖尿病诊断标准和亚太地区成人超重和(或)肥胖标准)：①糖尿病症状+任意时间血浆葡萄糖水平>11.1 mmol/L(200 mg/dl)；②空腹血浆葡萄糖(FPG)水平>7.0 mmol/L(126 mg/dl)；③OGTT试验中，餐后2 h血糖水平>11.1 mmol/L(200 mg/dl)。未用过胰岛素，噻唑烷二酮类及其他口服降糖药物，并排除继发性2型糖尿病的可能。
1.3 方法
①样本采集 所有受检者均隔夜空腹8 h以上，清晨抽静脉血8 mL，其中一支EDTA-K2抗凝血2 mL，充分摇匀，彻底抗凝，作抵抗素单核苷酸多态性之用。两支干燥管各注入3 mL血液，干燥管3 000 rpm/min离心15 min；一支分离血清，-20°C保存，用于抵抗素、胰岛素检测；另一支检测基础生化项目，包括空腹葡萄糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-CH)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CH)。②基因分型 按通用基因组DNA提取试剂盒说明书提取基因组DNA。由广东省深圳市华大基因公司采用美国 SEQUENOM 公司的MassARRAY 时间飞行质谱技术(MALDI-TOF MS)完成对抵抗素SNP的基因分型。通过 PCR 扩增，SAP 酶处理，延伸引物单碱基延伸，树脂除盐纯化，芯片点样，质谱检测等实验步骤，最终使用 Typer 4.0 软件分析实验数据，获得基因分型结果。③抵抗素的检测 采用双抗体夹心ELISA法。实验仪器为STAR全自动样本工作站和FAME全自动酶标分析仪。④空腹胰岛素(fasting insulin，FIN)的检测 采用化学发光技术即化学发光微粒免疫分析。实验仪器为罗氏cobase 411 全自动电化学发光免疫分析仪。计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，IRI=空腹血糖×空腹胰岛素/22.5。⑤其他生化指标的检测 空腹葡萄糖采用葡萄糖氧化酶法测定，总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇采用终点法测定，低密度脂蛋白胆固醇采用选择性抑制直接法测定。, http://www.100md.com(杨冰 刘忠民)
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[关键词] 抵抗素；基因多态性；2型糖尿病
[中图分类号] R541 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)21-0048-04
人的抵抗素基因存在多种单核苷酸多态性(SNP)现象，而SNP与2型糖尿病间的相关性，目前并无统一定论，可能与研究样本的数量、病例及位点的选取有关，更可能与不同种族间的糖尿病易感性及个体差异有关。我们研究抵抗素水平和抵抗素基因rs34861192位点多态性与T2DM的关系，分析此抵抗素基因是否为2型糖尿病的易感基因，为2型糖尿病的早期预测、诊断、治疗及预后提供分子生物学依据。
1材料与方法
1.1材料
仪器与试剂 ① 实验仪器：质谱检测仪(MassARRAY Analyzer Compact)，点样仪(MassARRAY Nanodispenser)，384 孔双头 PCR 仪(GeneAmp PCR System 9700 Dual 384-Well Sample Block Module)，6mg 384纯化板(SEQUENOM 公司)，STAR全自动样本工作站和FAME全自动酶标分析仪，罗氏cobase 411 全自动电化学发光免疫分析仪。 ② 主要试剂：通用基因组DNA提取试剂盒(广州市达晖生物技术有限公司)，iPLEX PCR反应试剂盒(SEQUENOM 公司)，384-well SpectroCHIP 生物芯片(SEQUENOM 公司)，HOTSTART Taq酶(SEQUENOM 公司)，虾碱性磷酸酶(SAP酶，SEQUENOM 公司)，阳离子交换树脂(SEQUENOM 公司)，阳性质控YH(深圳华大基因研究院培育的“炎黄一号”细胞株DNA)，抵抗素(RapidBio Lab Calabasaa)，胰岛素(Abbott Japan CO，LTD)，葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯(中生北控生物科技股份有限公司)，高密度脂蛋白胆固醇(日本第一化学药品株式会社)，低密度脂蛋白胆固醇(DiaSys Diagnostie Systems GmbH，德赛)。
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1.2 对象
(1)正常对照组(CON组)：健康体检的150例个体，无T2DM(均检测空腹及餐后2 h血糖)，无冠心病(无主述史并且心电图无异常)，体重指数(body mass index，BMI)<25 kg/m2。(2)T2DM组：新诊断的T2DM患者100例(符合1999年WHO糖尿病诊断标准和亚太地区成人超重和(或)肥胖标准)：①糖尿病症状+任意时间血浆葡萄糖水平>11.1 mmol/L(200 mg/dl)；②空腹血浆葡萄糖(FPG)水平>7.0 mmol/L(126 mg/dl)；③OGTT试验中，餐后2 h血糖水平>11.1 mmol/L(200 mg/dl)。未用过胰岛素，噻唑烷二酮类及其他口服降糖药物，并排除继发性2型糖尿病的可能。
1.3 方法
①样本采集 所有受检者均隔夜空腹8 h以上，清晨抽静脉血8 mL，其中一支EDTA-K2抗凝血2 mL，充分摇匀，彻底抗凝，作抵抗素单核苷酸多态性之用。两支干燥管各注入3 mL血液，干燥管3 000 rpm/min离心15 min；一支分离血清，-20°C保存，用于抵抗素、胰岛素检测；另一支检测基础生化项目，包括空腹葡萄糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-CH)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CH)。②基因分型 按通用基因组DNA提取试剂盒说明书提取基因组DNA。由广东省深圳市华大基因公司采用美国 SEQUENOM 公司的MassARRAY 时间飞行质谱技术(MALDI-TOF MS)完成对抵抗素SNP的基因分型。通过 PCR 扩增，SAP 酶处理，延伸引物单碱基延伸，树脂除盐纯化，芯片点样，质谱检测等实验步骤，最终使用 Typer 4.0 软件分析实验数据，获得基因分型结果。③抵抗素的检测 采用双抗体夹心ELISA法。实验仪器为STAR全自动样本工作站和FAME全自动酶标分析仪。④空腹胰岛素(fasting insulin，FIN)的检测 采用化学发光技术即化学发光微粒免疫分析。实验仪器为罗氏cobase 411 全自动电化学发光免疫分析仪。计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，IRI=空腹血糖×空腹胰岛素/22.5。⑤其他生化指标的检测 空腹葡萄糖采用葡萄糖氧化酶法测定，总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇采用终点法测定，低密度脂蛋白胆固醇采用选择性抑制直接法测定。, http://www.100md.com(杨冰 刘忠民)