δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠血清HMGB1表达的影响及其作用的研究(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1材料与方法
1.1材料
δ阿片受体激动剂购自美国Sigma公司，分子式为C29H39N5O7。大鼠高迁移率族蛋白B1的ELISA定量检测试剂盒购自日本Shino-Test公司。
1.2 动物的分组及脓毒症模型的建立
取清洁级健康雄性SD大鼠96只，体重250～300 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，将其随机分为三组：假手术组(SO组)、脓毒症组(SEP组)及DADLE治疗组，32只一组，通过改良盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症模型，按照Wichterman等[4]的改良盲肠结扎穿孔法(CLP)，将盲肠穿孔数增至4个，假手术组开腹后不施行CLP，余操作同SEP组，DADLE治疗组在制模后立即腹腔内注射浓度为0.5 mg/mL的DADLE，按5 mL/kg体重。CLP后分别在6 h、12 h、18 h及24 h时每组断颈处死8只大鼠，取血通过ELISA法测定血清HMGB1浓度，并于24 h留取动脉血标本检测血清ALT、AST、BUN、Cr、CK及PaO2的水平。
1.3 指标的检测及方法
1.3.1 血清HMGB1的检测 ELISA法测定血清HMGB1浓度。
1.3.2 血清各生化指标检测 血清ALT、AST、BUN、Cr及CK的水平采用美国杜邦Dade Behring Rxl生化分析仪测定。
1.3.3 动脉血气分析 采用美国实验仪器公司 GEM 3000血气分析仪测定。
1.4 统计学方法
所有数据统计采用SPSS 10.0软件统计处理。结果以均数±标准差(x±s)表示，通过方差分析进行多组间比较，组间两两比较用q检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 血清HMGB1的变化及DADLE的干预作用
如表1所示，术后6 h SEP和DADLE治疗组血清HMGB1水平开始升高，但三组间差异无明显统计学意义(P > 0.05)；12 h SEP组和DADLE组血清HMGB1水平较SO组均显著升高(P < 0.05)，且DADLE组显著低于SEP组(P < 0.05)；SEP组和DADLE组血清HMGB1水平在18 h时达到最高，且DADLE组明显低于SEP组(P < 0.05)；24 h时，SEP组及DADLE组的血清HMGB1水平较18 h时有所下降，但此时DADLE组HMGB1水平仍显著低于SEP组(P <0.05)。
2.2 24 h血清各脏器生化指标的变化及DADLE干预作用
见表2所示，与SO组比较，DADLE组和SEP组ALT、AST、BUN、Cr、CK水平均显著升高(P < 0.05)，PaO2均显著下降(P < 0.05)；与SEP组相同时点比较，各DADLE治疗组24 h血清ALT、AST、BUN、Cr、CK水平均显著下降(P < 0.05)，而PaO2则显著升高(P < 0.05)。
2.3 脓毒症组24 h血清HMGB1与各脏器生化指标变化的相关性分析
血清HMGB1与血清ALT、AST、BUN、Cr、CK均呈显著正相关(P < 0.05)，与PaO2则呈显著负相关(P < 0.05)。
3 讨论
脓毒症是感染、创伤等各种原因引起的全身炎症反应综合征。脓毒症伴器官功能障碍属于严重脓毒症，有高达50%的病死率[5]。通过盲肠结扎穿孔法建立啮齿类动物标准的脓毒症模型[6]，导致严重腹膜炎及致死性脓毒症综合征时，相较于TNF-α、IL-1等早期炎性细胞介质，HMGB1出现晚，持续时间长。HMGB1血清水平在CLP后24～48 h明显增加，因其分泌特点，HMGB1被称为晚期炎症介质[7]。
本研究显示，SEP组12 h、18 h及24 h时血清HMGB1水平均较同时相SO组显著升高(P均 < 0.05)，通过相关性分析表明，血清HMGB1与血清ALT、AST、BUN、Cr、CK呈显著正相关(P均 < 0.05)，与PaO2呈显著负相关(P < 0.05)，提示血清HMGB1参与了脓毒症机体损伤的发生、发展过程，血清HMGB1水平的升高与脓毒症大鼠多脏器功能不全的发生有关。有资料显示，通过使用抗HMGB1抗体能够显著降低脓毒症大鼠的死亡率，即使在脓毒症发生24 h后，其仍有明显的保护作用，因此相较于早期炎症因子，HMGB1出现晚、持续时间更长，能给脓毒症的治疗提供更广的时间窗[8]。DADLE作为人工合成的非选择性δ阿片受体激动剂，有实验表明其能改善组织缺氧状态时的能量代谢[9]。尽管DADLE已被应用到针对脓毒症的研究当中，但其对脓毒症组织损害的影响及机制尚不明了。本研究采用CLP法建立脓毒症大鼠模型，观察了SEP组、DADLE治疗组各脏器功能以及血清HMGB1的变化。结果提示，与SEP组相同时间点比较，DADLE治疗组24 h肝、肾、心、肺各器官功能指标血清ALT、AST、BUN、Cr、CK水平均显著下降，PaO2则均明显升高，提示DADLE对脓毒症大鼠重要脏器功能具有一定的保护作用。通过对各组血清HMGB1水平变化的观察，发现DADLE处理组HMGB1水平较同时相SEP组均有显著下降，且与肝、肾、心、肺器官功能指标呈显著相关。因此本研究提示，DADLE通过抑制血清HMGB1的表达，达到减轻脓毒症时的炎症反应，发挥其对脏器功能的保护作用。
综上所述，脓毒症时大鼠血清HMGB1显著增高，其升高与脏器功能损害存在相关性，而DADLE通过抑制血清HMGB1的升高而起到治疗作用，从而为脓毒症的治疗及临床应用提供新的方向。
[参考文献]
[1] Angus DC，Pereira CA，Silva E. Epidemiology of severe sepsis around the world[J]. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2772kb)。