心房颤动心肌NF—κB的表达(1)
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[摘要] 目的 探讨炎症与房颤发生与维持的关系。 方法 研究对象为40例风湿性心脏病接受换瓣手术者，按病史及心电图表明的心律情况分为二组，窦性心律组22例，慢性房颤组18例。以免疫组织化学方法定性测定NF-κB表达及分布；用EMSA方法测定NF-κB蛋白含量。 结果 与窦性心律组比较，慢性房颤组心房组织中NF-κB明显增加(P<0.01)。 结论 慢性房颤患者心房组织中NF-κB的表达增加，可能是房颤时炎症参与的证据之一。
[关键词] 心房颤动；炎症；核转录因子κB
[中图分类号] R541.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2012)32-0044-02
核因子κB(NF-κB)体系主要涉及机体防御反应、组织损伤和应激、细胞分化和调亡以及肿瘤生长抑制过程的信息传递。本研究观察了NF-κB表达水平，探讨NF-κB在风湿性心脏病(简称风心病)伴房颤患者心房肌结构重构中的分子机制。
1 材料与方法
1.1 研究对象
选取福建医科大学附属第一医院心外科2011年1～12月40例风湿性心脏病手术患者，男16例，女24例，年龄(42.16±10.02)(20～64)岁。分两组：窦性心律组22例，慢性房颤组18例。各组患者的其他临床资料如性别、年龄、左室射血分数和心功能NYHA分级等无明显差异。见表1。
1.2 标本的采集
在手术建立体外循环心脏停跳前获取右心耳组织，用冷却生理盐水冲洗，干燥，称重取250 mg，迅速置入装有液氮的冷冻管，然后转入-80℃深低温冰箱冻存备用。
1.3 用免疫组织化学方法检测
检测方法参照福建厦门慧嘉生物科技有限公司UhraSensitive SP超敏试剂盒说明书进行。对备好标本间断均匀切片5张，每片厚度4 mm，贴附于载玻片上，60 ℃烤片4 h备用。检测结果判定：NF-κB蛋白染色阳性信号为棕色颗粒，大量表达于心房肌细胞浆中；免疫组化分析：每份标本随机分别选取5个高倍视野(×400倍)，采用免疫组化分析软件(Image-proPlus IPP)，在SigmaScan4.0图像分析系统上，对选取视野内免疫组化阳性信号进行图像分析，测定心肌间质阳性颗粒的累积光密度(IOD)。
1.4 用电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay EMSA)检测NF-κB含量
DNA NF-κB探针是5’-AGT TGA GGG GACTTT CCC AGG C-3’和-3’-TCA ACT CCCCTG AAA GGG TCC G-5’取标本150 mg，研磨成均浆，用2500转离心机离心，去除上清液，用G-25离心柱(Boehringer Mannheim，Mannheim，Germany)纯化，标本被保存在冰水里45 min，在非变性的聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离3.5 h，电压200V。烤干备用，干凝胶被Storm 820显像仪显像，放射性带用图像分析软件(Amersham，Piscataway，NJ，USA)分析。
1.5 统计学处理
各组数据以均数±标准差(x±s)表示。统计处理均由SPSS 12.0软件包完成，用t检验分析，以P < 0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 两组间心房肌NF-κB蛋白定性及心肌损伤的比较
2.2 组间心房肌细胞NF-κB含量的比较
房颤组患者NF-κB含量(16400±1800) arbitrary units，明显高于对照组窦性心率组的NF-κB含量(11900±1500 arbitrary units)(表2)。
3 讨论
众所周知解剖重构是房颤发生和持续的基质。大量研究表明[1，3]，心房解剖重构在房颤的发生和维持中发挥极其重要的作用。病理学实验表明房颤的心房肌组织中存在明显的心肌结构改变和单核细胞的浸润[4，5]，说明炎症反应与心房重构关系密切。本研究设计了几个试验验证或进一步证实了房颤患者炎症反应与房颤患者心房解剖重构关系密切。现就本研究的设计及结果作一些探讨。
研究对象的选择方面：风湿性心脏病患者心脏瓣膜本身存在炎症现象，这对实验有何影响？风湿性心脏病患者心脏瓣膜本身确实存在炎症，但其炎症范围一般仅限于瓣膜，而右心耳组织并不受其影响，有研究证实，风湿性心脏病窦律患者右心耳组织中并无明显的炎性细胞浸润。同时本研究的实验组和对照组都是风湿性心脏病患者，因而其结果具有可比性。
本研究的免疫组化试验结果提示与窦性心律组比较，慢性房颤组患者心房肌细胞中NF-κB表达更为明显；基质中浸润的单核细胞数更多。验证了房颤患者心房组织中炎症细胞及NF-κB的存在及表现更为明显，也验证炎症和房颤患者心房解剖重构的相关性。
电泳迁移率实验结果定量的说明房颤的发生可能与NF-κB关系密切。
作为一个关键的炎症始动因子[6]，NF-κB是一个广泛存在于血管平滑肌细胞、心肌细胞的多功能的转录因子。有实验证明[7，8]他汀类药物通过减少NF-κB活性显示出了其抗炎的作用，抑制了心肌细胞的纤维化，从而终止房颤发生。一项由Xu等[9]做的回顾性分析揭示长期服用他汀药物患者比未服用他汀药物患者更少发生心血管事件 ......
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