糖尿病患者结合珠蛋白基因多态性与冠脉狭窄相关性研究(1)
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[摘要] 目的 探讨糖尿病患者结合珠蛋白基因多态性与冠状动脉狭窄严重程度的相关性。 方法 选择98例糖尿病合并冠心病患者以及77例单纯糖尿病患者，采用PCR-SSP技术检测结合珠蛋白基因型，据此对糖尿病合并冠心病患者进行分组，采用Gensini冠状动脉评分系统(Gensini积分)对冠状动脉的狭窄程度进行评分。 结果 糖尿病合并冠心病组Hp基因型分布与单纯糖尿病组相比差异有统计学意义，表现为Hp2-2基因型在糖尿病合并冠心病组的频率明显高于单纯糖尿病组(0.55 vs 0.35，P < 0.05)。糖尿病合并冠心病组间，Hp2-2基因型组的Gensini 积分明显高于Hp1-1/Hp1-2 基因型组(P < 0.05)。 结论 Hp2-2基因型可能与糖尿病患者冠心病的发生相关，且与糖尿病患者冠脉狭窄的严重程度相关。
[关键词] 糖尿病；结合珠蛋白(Hp)；基因多态性；冠状动脉狭窄
[中图分类号] R541.4 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2013)01-0030-03
糖尿病已经成为动脉粥样硬化和冠心病最重要的危险因子，氧化应激和炎症反应在动脉粥样硬化过程中有重要作用。研究显示动脉粥样硬化的发生与基因的多态性有关[1，2]。结合珠蛋白(Haptoglobin，Hp)又称触珠蛋白，是一种酸性糖蛋白，属急性期反应蛋白之一，具有抗氧化活性、抑制前列腺素合成、促进血管生成及调节机体免疫等功能[3]。人类Hp基因位于染色体16q22.1，存在基因多态性，表现为Hp1-1、Hp1-2和Hp2-2三种基因型[4]。国外研究发现Hp2-2基因型是糖尿病患者心血管并发症出现的独立危险因子，Hp2-2基因型的糖尿病患者更容易出现心血管并发症。本研究采用PCR-SSP技术检测结合珠蛋白基因型，采用Gensini积分对冠状动脉的狭窄程度进行评分，探讨糖尿病患者结合珠蛋白基因多态性与冠心病的发生及冠脉狭窄严重程度的相关性。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2010年5月～2011年1月青岛市市立医院西院心内科经过冠脉造影确诊的98例糖尿病合并冠心病患者，其中男60例，女38例，年龄47～77岁，平均(57.72±9.95)岁，以及同期经冠脉造影或冠脉CTA检查排除冠心病的77例单纯糖尿病患者，其中男48例，女29例，年龄48～76岁，平均(58.64±10.14)岁。糖尿病诊断符合1999年WHO糖尿病诊断标准。
1.1.1 采用Judkins法行选择性冠脉造影检查 每支冠状动脉均经多体位投照。冠心病的诊断根据临床表现结合冠脉造影结果，至少1支冠脉血管狭窄>50%确诊为冠心病。采用Gensini 冠状动脉评分系统(Gensini 积分)对冠脉的狭窄程度进行评分。根据冠脉造影结果，将冠脉分成14段，狭窄程度以最严重处为标准：狭窄直径≤25%记1分，狭窄直径25%～50%记2分，狭窄直径51%～75%记4分，狭窄直径76%～90%记8分，狭窄直径91%～99%记16分，狭窄直径100%记32分。病变血管不同节段权重系数：左主干×5，前降支近段×2.5，前降支中段×1.5，前降支远段×1，回旋支近段×2.5(开口处×3.5)，回旋支远段、钝缘支、右冠状动脉、后降支及第1对角支均×1，第2对角支及后侧支×0.5。
1.1.2 排除标准 所有对象均做血常规、肝肾功、血脂、血糖、糖化血红蛋白、12导联心电图、胸片、心脏彩超，除外既往经皮冠状动脉成形术或冠脉旁路移植术、心脏瓣膜病、结缔组织病、恶性肿瘤、肝肾功能不全、严重创伤、手术或感染。半月内服用过他汀类调脂药、非甾体类消炎药、抗生素等药物的患者，均不能入选本研究。
1.2 Hp基因型的检测
采集受试者的静脉血2 mL，EDTA抗凝，置于离心机内以1 800 rpm离心10 min，分离出血浆。用天根公司提供的血液基因组DNA提取试剂盒提取受试者血液DNA。参考Werner Koch[3]对Hp基因分型的PCR实验方法进行分型检测。用引物A和B扩增Hp1特异性的1 757 bp片段，用引物C和D扩增Hp2特异性的349 bp片段。上游引物A：5’-GAGGGGAGCTTGCCTTTCCATTG-3’，下游引物B：5’-GAGATTTTTGAGCCCTGGCTGGT-3’，上游引物C：5’-CCTG-CCTCGTATTAACTGCACCAT-3’，下游引物D：5’-CCGAGTGCTCCACATAGCCATGT-3’。PCR反应体系为模板DNA 5 μL，10×Tap plus Buffer(with MgCl2)2.5 μL，2.5 mmol/L dNTP Mixture 2 μL，10 μmol/L上下游引物各0.5 μL，Tap plus DNA聚合酶(2.5 U/μL)0 ......
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