祁连圆柏叶乙醇提取物挥发性成分GC—MS分析
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[摘要] 目的 采用气相色谱-离子肼质谱联用法测定分离祁连圆柏叶中乙醇提取物。方法 用70%乙醇常温浸渍提取祁连圆柏叶中成分，用气相色谱-离子肼质谱仪对所得的祁连圆柏叶浸膏进行鉴定分析，色谱图用面积归一化法测定组分的相对百分含量。结果 所得的质谱图采用去卷积化分析并在 NIST 98标准图谱库中比对检索化合物，共鉴定了12个组分，按面积归一化法计算，其峰面积比重占挥发性成分的90%。结论 通过采用自动质谱退卷积定性系统(AMDIS)处理数据，增加对目标成分定性的准确性，提高色谱峰纯度，从而提高了定性的准确性。
[关键词] 气相色谱-离子肼质谱；祁连圆柏；挥发性成分；面积归一化法；AMDIS
[中图分类号] R284 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2013)01-0070-02
祁连圆柏(Juniperus Przewalskii Kom)[1，2]为常绿乔木，性味苦涩、微寒，可用于治疗咯血、尿血、便血等，是一种常用藏药的药源植物。近年来有研究发现[3]，祁连圆柏种子及树叶中均含有挥发性的二帖类成分，药材气味芳香，对女性卵巢癌有较好的抑制效果。另外王索安等[4]研究发现祁连圆柏提取物对人胃癌细胞SGC-7901细胞具有明显的增值抑制及诱导凋亡作用。本实验采用70%乙醇提取祁连圆柏叶子中的有效成分，采用气相色谱结合质谱分析祁连圆柏叶子中的挥发性物质，并结合标准质谱图谱库NIST98搜索并初步分析其中的成分，并希望通过初步的成分分析，为以后的有效成分分离确定及药效学工作打下基础。
1 材料与方法
1.1 材料
Finnigam Innigam Trace GC Ultra气相色谱仪，Finnigam Polaris Q 离子肼质谱检测器、Dikma Cp-sil 5CB-MS FS(30 m×0.25 mm ID×0.25 μm df)毛细管气相色谱柱，Thermo AS 3000自动进样器。祁连圆柏叶子粉末药材采自青海甘肃(由浙江医学高等专科学校药学系天然药物实验室邓茂芳副教授鉴定)，其他溶剂(乙醇、三氯甲烷、石油醚)均为分析纯。
1.2 方法
1.2.1 供试液提取及处理 称取祁连圆柏干燥药材叶子粉末200 g，置500 mL圆底烧瓶中，先加入适量石油醚浸提至无色，再用70%乙醇600 mL，常温浸渍3～4次至无色。浸渍液纱布过滤后，滤液用旋转蒸发仪挥发干净，得浸膏。称取约100 mg 浸膏用2 mL三氯甲烷溶解得供试液，备用。
1.2.2 GC-MS条件 毛细管气相色谱柱Restek DB-5，载气：高纯氦气，流速1.0 mL·min-1，进样口温度：300℃，接口温度：280 ℃，离子源温度200 ℃，进样方式：不分流进样，柱程序升温：初温80℃，保持1 min后，以5 ℃·min-1的速率升温至200 ℃，保持15 min。进样量为1 μL。从进样5 min开始质谱以全扫描方式检测，扫描范围：(33～420) m/z，电离方式为EI，电子轰击能量为70 eV，倍增电压1300 V。其气相色谱图见图1。
2 结果
取上述供试液，按前述“1.2.2”条件分别进行GC-MS分析。经扫描后得色谱峰的总离子流图，采用AMDIS 处理GC/MS 数据文件，用AMDIS 对文件中每个离子的质量色谱图进行分析，对不同的峰选取1～2个模型离子(model ion)，比较其他离子与模型离子峰在保留时间和峰形上的相似度，确定该离子是否归属于此峰。整个文件扫描后，将所有具有相同保留值和峰形的离子组合成一张新的质谱图，分别对新建谱图、原始谱图在NIST98谱库中进行检索，分析比较不同重叠程度对拆分结果的影响。确认各化合物；通过Xcalibur工作站数据处理系统，按峰面积归一化法计算各化合物相对百分含量。结果见表1。
3讨论
祁连圆柏是常用中藏药。2000 年宗玉英等[5]对110 种植物藏药进行了体外筛选实验， 发现5 种中藏药对人乳腺癌、肺癌、口腔上皮癌具有杀伤作用， 但抗肿瘤机制不明， 祁连圆柏是其5 种之一。本实验采用气相色谱-离子肼质谱法对祁连圆柏叶乙醇提取物挥发性成分进行分析， 由表可知， 已鉴定的化合物占提取物总量的80%以上， 已鉴定的成分占总峰面积的90%以上。在已鉴定的组分12个组分中， 有多种组分是文献未曾报道过的。其中检出一种与贝母碱结构类似的物质——Verticiol(图2)，其主要药效表现为镇咳也与文献报道祁连圆柏的临床运用基本一致。首次检出的桃柁酚文献报道[6]具有对金黄色葡萄球菌有很好的抑制作用。在检出的成分中包含海松酸及海松醛等成分均在松科植物的树脂(松脂)中发现过，说明柏科植物挥发性成分与松科植物挥发性成分物质具有一定的相似性。在处理离子肼质谱数据过程中，由于测试样品背景比较复杂，干扰较多，常规的扣减本底干扰的方法不能很好的消除影响。通过采用自动质谱退卷积定性系统(AMDIS)处理数据，可以较好的消除重叠峰质谱图互相干扰，增加对目标成分定性的准确性，提高色谱峰纯度，从而提高了定性的准确性。
综上，这一研究结果将为我国西北地区的祁连圆柏资源进一步开发利用提供有益的帮助。
[参考文献]
[1] 高静 ......
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