吡格列酮对家兔局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响(1)
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[摘要] 目的 探讨吡格列酮对脑缺血再灌注损伤家兔细胞凋亡的影响及其机制。 方法 40只雄性家兔随机分为5组：①假手术组(S组，n = 8)；②模型组(M组，n = 8)；③吡格列酮组(P组，n = 8)；④GW9662+吡格列酮组(GP组，n = 8)；⑤DMSO组(D组，n = 8)。除S组外，其余各组均通过线栓法建立家兔大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注损伤模型。于术前30 min分别给予相应处理。缺血120 min再灌注24 h后，对家兔进行神经功能评分；HE染色观察病理形态学，TUNEL检测神经细胞凋亡。 结果 ①与S组比较，M组神经功能评分明显增加(P < 0.05)；与M组比较，P组神经功能评分明显降低(P < 0.05)。②与S组比较，M组凋亡细胞明显增加(P < 0.05)；与M组比较，P组凋亡细胞明显降低(P < 0.05)。 结论 吡格列酮可通过减轻形态学改变、抗神经细胞凋亡，对神经细胞发挥保护作用。
[关键词] 吡格列酮；GW9662；脑缺血/再灌注；细胞凋亡
[中图分类号] R743.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2013)04-0001-03
近年研究表明，PPARγ表达的升高对于脑缺血再灌注损伤具有一定的神经保护作用[1]，已成为脑血管病研究领域中的热点课题。作为PPARγ的激活配体——吡格列酮(pioglitazone，PGZ)临床上广泛应用于治疗2型糖尿病，但有研究表明其对脑缺血再灌注损伤具有一定的神经保护作用[2]，而具体机制尚未完全阐明。本实验采用家兔局灶性脑缺血再灌注模型，应用PGZ进行预处理，观察其对家兔术后神经功能及细胞凋亡的影响。
1 材料与方法
1.1 动物分组
清洁级雄性家兔40只，重量750～1 000 g。术前12 h禁食不禁水，随机分为5组，每组8只：①假手术组(S组)；②模型组(M组)；③吡格列酮组(P组)；④GW9662+吡格列酮组(GP组)；⑤DMSO组(D组)。
1.2 试剂
吡格列酮、GW9662和10%二甲基亚砜(DMSO)(Sigma公司，美国)；原位末端标记(TUNEL)试剂盒(Promega公司)；电子显微镜(Olympus，日本)等。
1.3 动物模型制备及处置
M组：术前20 min经耳缘静脉注射生理盐水2 mL/kg，采用改良的Zea-longa[3]法制备家兔大脑中动脉阻断(MCAO)模型。缺血120 min后抽出线栓即可造成再灌注模型。模型成功标志：苏醒后出现左侧Horner综合征；爬行时向右侧转圈或跌倒。P组：术前20 min经耳缘静脉注射吡格列酮10 mg/kg。GP组：术前20 min先经耳缘静脉注射GW9662，剂量是0.3 mg/kg[4]，5 min后再经耳缘静脉注射吡格列酮10 mg/kg。D组：术前20 min经耳缘静脉注射10% DMSO 2 mL/kg。S组：术中分离左侧CCA、ICA及ECA，但不做任何缺血处理。
1.4 指标检测
1.4.1 神经功能评分 再灌注24 h后采用双盲法按Zea-longa 5分法进行神经功能评分，标准如下：①无神经功能缺失症状，计0分；②不能伸展右侧前肢，计1分；③爬行时向右侧转圈，计2分；④身体向右侧倾倒，计3分；⑤不能自发爬行、意识障碍，计4分。
1.4.2 HE染色 将各组8只家兔麻醉，以生理盐水进行心脏灌洗，用4℃ 10%多聚甲醛灌洗固定，并迅速断头取脑。距额叶前端3 mm和9 mm处进行冠状分离，取中间6 mm厚的脑组织块，然后沿此脑块矢状缝两侧约2 mm处，从上至下切去两侧半球的正中结构，将左侧脑块作为缺血脑组织，制成蜡块。自前往后连续冠状位切片，厚约5 μm。HE染色光学显微镜下(400×)观察神经细胞形态学变化并采图。
1.4.3 TUNEL染色 严格按照试剂盒检测步骤进行操作。TUNEL染色在光镜下(400×)观察凋亡细胞(以胞核出现棕黄染色颗粒代表)，计算TUNEL阳性率即TUNEL阳性细胞数占总细胞数的比值并采图。
1.5 统计学处理
应用SPSS 17.0软件进行统计学分析。神经功能评分中位数/四分位数法表示，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，两两比较采用Nemenyi检验。计量资料用均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 一般状况及神经功能改变
S组家兔对外界反应灵敏，其余4组家兔对外界反应灵敏度不同程度降低，其中以M组最迟钝 ......
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