温州无偿献血人群丙肝病毒感染情况及其基因型的研究(2)
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1.3.2 RT-巢式PCR检测HCV-RNA和基因分型 具体操作参照okamoto法[1]进行。主要步骤为：提取血清总RNA；逆转录合成cDNA，以HCVCore基因区分型PcR引物(引物序列见表1)行套式PCR扩增，两轮PCR 反应体系和反应条件相同。反应体系：10 倍稀释的PCR 缓冲液3 μL，2.5 mmol/L，dNTP 2 μL，dH2O 20.6 μL，上、下游引物各1.5 μL，Taq 酶0.4 μL，模板DNA 1 μL，共计30 μL；反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，55℃退火30 min，72℃延伸30 s，35 个循环，72℃延伸10 min。以聚丙烯酞胺凝胶电泳分析PCR终产物。
表1 HCV-RNA基因分型所用引物
2 结果
2.1 2010～2012年度温州市无偿献血血液检测抗-HCV 不合格率情况
2010～2012年度温州市无偿献血者血液抗-HCV检测不合格率见表2，丙肝病毒的感染情况总体趋稳，各年份变化不大，但相比湖南岳阳市2006～2010年[2]、深圳市宝安区2004～2011年[3]报道的平均不合格率低。
表2 2010～2012年度温州市无偿献血者血液抗-HCV检测不合格率
注：*与2012年比较，**与2010年比较，#与2011年比较
2.2 RT-巢式PCR检测HCV-RNA结果(图1)
PCR产物长度为144 bp对应基因型为1b，PCR产物长度为174 bp对应基因型为2a，PCR产物长度为144 bp和174 bp则对应基因型1b、2a。
图1 HCV基因型分型结果，A为1b阳性(144bp)，2a阴性，B为1b阴性，2a阳性(174bp)，C为1b阳性(144bp)，2a阳性(174bp)
2.3 HCV-RNA基因分型结果
在所检测的68例标本中基因型1b占30 ......
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