碱性成纤维细胞生长因子与瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白代谢的研究(2)
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参见附件。
1.2.2实验干预 将生长较好的细胞选出，调整细胞浓度并接种于孔板上。将其随机分为4组，将不同浓度的bFGF加入细胞中，浓度分别为0 pg/L组、50 pg/L组、100 pg/L组、500 pg/L组。同时加入2 mL DMEM培养液继续培养3 d。
1.2.3测定HPr、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(CoⅠ 、CoⅢ)mRNA以及MMP-1 ①HPr的测定：取培养液上清，应用氯胺T法测定。将0.1 mLHPr加入测定管，空白管调零，读取吸光度。②CoI 、CoⅢmRNA表达检测：应用RT-PCR方法，先提取总RNA，计算其总纯、浓度，再取少量(1 μg)进行反转录，得出cDNA，进行保存。用PCR产物得出mRNA结果，m RNA相对含量=PCR产物(GADPH吸光度×面积)。③MMP-1检测：应用Western blot方法检测，通过荧光放射显像。
1.3统计学分析
采用SPSS13.0统计软件分析，组间比较采用方差齐性检验，P<0.05代表差异有统计学意义。
2 结果
2.1培养与鉴定瘢痕Fb的结果
经Massion 方法对所选组织进行染色，发现排列紊乱的胶原纤维，并且见不同程度新血管形成，均符合增生性瘢痕特点。对原代组织块培养4～6 d，可发现萌出的长梭形细胞，并且随着培养时间延续而加快生长速度，并进行传代。随后见排列整齐、旋涡状走行的传代Fb。经免疫荧光染色后，包质呈鲜红色，表明均为成纤维细胞。分别见图1～3。
2.2 不同浓度碱性成纤维细胞生长因子下，CoI 、CoⅢ、HPr以及MMP-1的变化
0 pg/L组、50 pg/L组、100 pg/L组、500 pg/L组，HPr、CoI 、CoⅢmRNA变化不明显 ......
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