MTT法检测氧化石墨烯的细胞毒性(2)
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1.2方法与步骤
1.2.1 PBS溶液的配制NaCl 8 g， KCl 0.2 g， Na2HPO4 1.56 g， KH2PO4 0.2 g， 加蒸馏水1000 mL。
1.2.2 MTT试剂的配制 将粉状 MTT 以 5 g/L的浓度溶于配制的100 mL PBS 溶液， 抽滤灭菌。
1.2.3丝素-氧化石墨烯复合膜(SF-GO)的制备 先将氧化石墨烯在真空干燥箱中干燥24 h，称取一定量的氧化石墨烯分散在二次水中，超声1 h，得到氧化石墨烯分散液，分别取出一定量的分散液加入到5个锥形瓶中，加二次水至10 mL，加入50 μL的冰醋酸，称取100 mg丝素蛋白5份，加入锥形瓶中，搅拌混合，将混合液倒入6孔板中，超声15 min脱气泡，50℃烘干48 h，得到氧化石墨烯添加量为0 wt%、0.1 wt%、0.2 wt%、0.5 wt%、1.0 wt%丝素-氧化石墨烯复合膜。
1.2.4 测定材料的细胞相对增殖率 将制作好的不同浓度的丝素-氧化石墨烯复合膜剪成直径为1 cm的小圆片，放入24孔板，各4孔，共接种4块板，每个孔分别加入1 mL的PBS液，将0 wt%浓度组设为对照组，15 min后将所有孔中PBS液吸出。将浓度为2.5×107个细胞/L的小鼠成纤维细胞 L929细胞悬液接种于放有不同浓度丝素-氧化石墨烯复合膜(SF-GO)的24孔培养板，每孔 1 mL，然后置于37℃、5% CO2培养箱中开放培养 1、3、5、7 d后分别吸去培养液，倒置显微镜下观察细胞形态，再加入5 g/L的 MTT液 0.1 mL， 继续在37℃培养4 h，吸弃原培养液， 每孔加入2 mL PBS小心清洗 2 次； 弃除余液 ......
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