真核表达载体pIRES2—AcGFP1—Ascl2的构建及表达
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2014年7月25日
真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Ascl2的构建及表达,HEKT细胞,Tfh细胞,自身免疫性疾病
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陈彦霞 刘津麟 李涯松 浙江省人民医院风湿免疫科;浙江省人民医院检验中心;
【摘要】目的构建真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Ascl2,并在真核细胞HEK293T细胞中表达,为今后研究Ascl2基因在Tfh细胞的相关分子机制奠定实验基础。方法 PCR方法扩增健康人外周血单个核细胞中Ascl2基因,连接至pIRES2-AcGFP1质粒的多克隆位点中,构建pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒。通过脂质体转染法对HEK293T细胞进行转染。Realtime-PCR及Westernblot方法分析转染pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒的HEK293T细胞中Ascl2表达情况。结果经Realtime-PCR及Westernblot方法,证实Ascl2基因能够在HEK293T细胞中正确表达。结论成功建立表达Ascl2基因的pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒,并能在HEK293T细胞中表达,为进一步研究Ascl2在自身免疫性疾病中Tfh细胞的相关机制奠定了实验基础。
【关键词】 Ascl HEKT细胞 Tfh细胞 自身免疫性疾病
【基金】浙江省自然科学基金立项课题(LQ14H100001)
【分类号】R392.1
滤泡辅助性T淋巴细胞(T follicular helper,Tfh)是近年研究发现的CD4+T细胞的新亚群[1]。它的特征性标志为CXCR5+、PD-1+、ICOS+、CCR7-、Bcl-6+。Tfh细胞在机体的生发中心形成和B细胞分化中起重要作用,在对维持机体的免疫平衡发挥重要作用,它的功能失调与自身免疫性疾病及免
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