丹参酮ⅡA对H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的保护机制(2)
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1材料与方法
1.1 细胞株与主要试剂
H9c2大鼠心肌细胞株来自美国ATCC，在含10%胎牛血清的高糖DMEM完全培养基内，5%CO2、37℃培养。JAK2激酶抑制剂(AG490，Calbiochem公司，美国)；丹参酮IIA(雅安三九药业有限公司提供，批号981011)。
1.2 心肌缺血再灌注模型建立及分组
按文献[3]方法对H9c2细胞进行缺血再灌注处理。配制正常台氏液：140 mmol/L NaCl，6 mmol/L KCl，1 mmol/L MgCl2，1 mmol/L CaCl2，5 mmol/L HEPES，5.8 mmol/L葡萄糖，pH 7.4。配制缺血台氏液：140 mmol/L NaCl，6 mmol/L KCl，1mmol/L MgCl2，1 mmol/L CaCl2，5 mmol/L HEPES，10 mmol/L D-2-脱氧葡萄糖，10 mmol/L Na2S2O4，pH 7.4。对数生长期细胞，去除培养基，PBS洗涤后，加入正常台氏液预培养1 h后制备缺血再灌注模型，加入缺血台氏液培养24 h。实验分为对照组、缺血再灌注组、丹参酮IIA组、AG490组及丹参酮IIA+AG490组。
1.3实验方法及观察指标
①细胞损伤的测定：采用CCK-8法测定细胞存活率，H9c2细胞加入缺血台氏液培养24 h后分别加入丹参酮IIA 2.5 μM，10 μM，40 μM，按照密度为2×104/孔接种至96孔板，于37℃孵育3 h后 ......
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