虹吸法制备冷沉淀质控不合格原因分析(1)
[摘要] 目的 探讨虹吸法制备冷沉淀不合格发生率及不合格的原因，为采供血机构制备出高质量的冷沉淀提供理论依据。 方法 回顾性分析2011年1月～2014年1月期间我血液中心质控科对我科采用虹吸法制备的冷沉淀质量控制结果，统计不合格原因，计算不合格率，并从各个环节探讨影响冷沉淀质量的因素。 结果 每个月随机抽检4袋，连续36个月，共抽检144袋，不合格产品共计17袋，不合格率为11.8%；不合格产品中，均为Ⅷ因子含量不足。 结论 冷沉淀不合格原因主要为Ⅷ因子含量不足，从原料血、原料血浆及冷沉淀制备等多个环节进行控制可以减少或预防不合格产品的出现。
[关键词] 冷沉淀；虹吸法；不合格原因；质量控制
[中图分类号] R457 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2015)02-0094-03
冷沉淀是从新鲜冰冻血浆中提取、低温下不溶解的血浆蛋白部分，主要含有第Ⅷ因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子、第XⅢ因子以及纤维结合蛋白等成分。近年来随着对冷沉淀临床应用领域的研究不断深入，冷沉淀临床应用范围也在扩大，不仅用于血液病的治疗，而且越来越多地用于各种外科手术及创伤引起的凝血机制异常等出血性疾病[1-5]。因此，冷沉淀的需求量也在不断增加。制备出足量、高质量的冷沉淀制品是采供血机构的职责。我们通过对2011年1月～2014年1月期间用虹吸法制备的冷沉淀质控结果进行分析，从各个环节探讨影响冷沉淀质量的因素，现报道如下。
, 百拇医药
1材料与方法
1.1 仪器设备及试剂
大容量低温离心机(德国贺利氏)、CT-4T-6C型数字控制水浴血液融化箱、热合机、DXJ-1型血浆速冻机(郑州)、因子Ⅷ活性测定试剂盒(凝固法)(德国希森美康公司)、纤维蛋白原检测试剂盒(德国希森美康公司)。
1.2 冷沉淀原料血浆
河南省红十字血液中心2011年1月～2014年1月期间制备的200 mL新鲜冰冻血浆，由400 mL新鲜全血在采集后6 h内经大容量低温离心机离心后分离并置-65℃冰箱速冻而成。
1.3 冷沉淀制备方法
我血液中心采用虹吸法制备冷沉淀，具体步骤：①全自动低温循环水浴融化箱预温至6℃，将新鲜冰冻血浆置于融化箱内，每次不超过30袋；②10 min后，将转移袋移至融化箱外的托盘中，并打开止流夹，调整至虹吸状态；③当血浆融化至剩余40～50 mL血浆及白色冷不融物时，关闭止流夹，热合断开，并迅速将其置于血浆速冻机中。
, 百拇医药
1.4 质控科常规抽检
2011年1月～2014年1月期间，每月随机抽检4袋，连续36个月，共计抽检144袋，每袋产品检测内容包括容量及Ⅷ因子、纤维蛋白原含量。Ⅷ因子、纤维蛋白原含量检测按试剂盒操作说明进行。
1.5 不合格产品判断
国家质量标准要求来源于400 mL全血制备的冷沉淀 FⅧ≥80 IU，纤维蛋白原含量≥150 mg，我血液中心容量为标示量50(mL)±10%，容量超标或不足、Ⅷ因子及纤维蛋白原含量不符合国家标准[6]均视为不合格产品。
2 结果
2.1 抽检结果
2011年1月～2014年1月期间共抽检36批次144袋产品中，不合格产品共计17袋，总不合格率为11.8%，总合格率为88.2%，见表1。由表1中数据可知，冷沉淀合格率呈增加趋势。
, 百拇医药
表1 2011年1月～2014年1月期间冷沉淀质控结果不合格例数统计
2.2 虹吸法制备冷沉淀不合格产品检测结果
不合格产品共计17袋，每袋产品均不同批次，均为Ⅷ因子含量低于国家标准，具体每袋产品检测结果见表2。
表2 虹吸法制备冷沉淀不合格产品检测结果(x±s)
注：每袋冷沉淀为IU，由200 mL新鲜冰冻血浆制备而成，国家标准：FⅧ含量≥80 IU/U
3 讨论
冷沉淀是从新鲜冰冻血浆中提取、低温下不溶解的血浆蛋白部分，主要含有第Ⅷ因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子、第XⅢ因子以及纤维结合蛋白等成分，是临床常用的血液成分之一。目前制备冷沉淀常用的方法有传统离心法和水浴虹吸法。由于传统离心法需要在4℃冰箱长时间缓慢融化至一段时间后，再进行离心分离，耗时长，Ⅷ因子衰减过多，再加上离心时不可避免使温度上升，从而导致Ⅷ因子丧失过多，最终使所制备的冷沉淀制品合格率较低[7-9]，难以满足临床需求。而虹吸法制备冷沉淀具备操作简单、制备时间短、温度恒定、Ⅷ因子含量高等优点，近年来该方法受到很多采供血机构的青睐。尽管虹吸法制备冷沉淀有诸多优点，笔者发现仍然有不合格产品出现，对不合格产品进行分析，有利于今后工作的改进，整体提高冷沉淀的质量，从而有利于临床患者的治疗。
, 百拇医药
从抽检结果看，纤维蛋白原含量合格率为100%，不合格原因主要为Ⅷ因子含量不足，总不合格率为11.8%。纤维蛋白原是较为稳定的凝血因子，冷沉淀的制备温度和制备时间对其影响较少，因此抽检合格率为100%，与李雪梅等[7]的报道一致。Ⅷ因子为不稳定凝血因子，主要参与内源性凝血过程，能形成凝血活酶，加速凝血因子Ⅹ活化，加快内源性凝血过程，Ⅷ因子含量不足直接影响着冷沉淀的临床应用效果。血液离体后，影响不稳定凝血因子质量的因素有多种，温度、时间、工作人员的操作方式等都能影响[10-13]。冷沉淀为新鲜冰冻血浆的衍生制品，新鲜冰冻血浆的质量也直接影响着冷沉淀的质量。制备新鲜冰冻血浆需要的全血，不仅要求符合制备成分血的要求，还需要在采血源头加以控制，要求一针穿刺成功、采血顺畅的全血，如果穿刺不顺畅、采血时间过长，可能会启动献血者的凝血机制，引起全血中的凝血因子含量异常，这种全血不宜制备新鲜冰冻血浆，在血液采集时，应对此类血液给予标识，以避免制备成新鲜冰冻血浆；另外，制备新鲜冰冻血浆的原料血即新鲜全血，应尽快放在4℃冰箱保存，尽可能减少不稳定凝血因子效价降低。全血分离制备出新鲜液体血浆后，要迅速在-65℃以下的速冻机中冻成固体状态，然后保存在-20℃以下的冰箱中。如果新鲜液体血浆在室温存放时间过长，也会影响血浆中不稳定凝血因子含量。冷沉淀制备过程中，影响不稳定凝血因子质量的因素也是多方面的，融化温度、时间都会影响冷沉淀的质量[14，15]。制备冷沉淀应使用专用低温水浴融化箱，微电脑能把温度控制在1～6℃，并能较好地控制融化速度，这些是保证冷沉淀质量的重要因素之一。冷沉淀制备好后，应尽快放置在-65℃以下的速冻机中冻成固体状态，速冻是保存凝血因子Ⅷ的关键步骤，速冻时，要把冷沉淀逐袋摆平，不要重叠堆放。临床患者输注冷沉淀时，重症患者常常需要一次性输入多袋产品以保证疗效，如果容量过多就会不可避免地增加患者的心脏负担或循环血容量。因此容量控制也很重要，要求工作人员制备时严把质量关，每袋产品都要用电子秤称重，以避免每袋冷沉淀容量过多。, 百拇医药(单泓 王姣杰)
[关键词] 冷沉淀；虹吸法；不合格原因；质量控制
[中图分类号] R457 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2015)02-0094-03
冷沉淀是从新鲜冰冻血浆中提取、低温下不溶解的血浆蛋白部分，主要含有第Ⅷ因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子、第XⅢ因子以及纤维结合蛋白等成分。近年来随着对冷沉淀临床应用领域的研究不断深入，冷沉淀临床应用范围也在扩大，不仅用于血液病的治疗，而且越来越多地用于各种外科手术及创伤引起的凝血机制异常等出血性疾病[1-5]。因此，冷沉淀的需求量也在不断增加。制备出足量、高质量的冷沉淀制品是采供血机构的职责。我们通过对2011年1月～2014年1月期间用虹吸法制备的冷沉淀质控结果进行分析，从各个环节探讨影响冷沉淀质量的因素，现报道如下。
, 百拇医药
1材料与方法
1.1 仪器设备及试剂
大容量低温离心机(德国贺利氏)、CT-4T-6C型数字控制水浴血液融化箱、热合机、DXJ-1型血浆速冻机(郑州)、因子Ⅷ活性测定试剂盒(凝固法)(德国希森美康公司)、纤维蛋白原检测试剂盒(德国希森美康公司)。
1.2 冷沉淀原料血浆
河南省红十字血液中心2011年1月～2014年1月期间制备的200 mL新鲜冰冻血浆，由400 mL新鲜全血在采集后6 h内经大容量低温离心机离心后分离并置-65℃冰箱速冻而成。
1.3 冷沉淀制备方法
我血液中心采用虹吸法制备冷沉淀，具体步骤：①全自动低温循环水浴融化箱预温至6℃，将新鲜冰冻血浆置于融化箱内，每次不超过30袋；②10 min后，将转移袋移至融化箱外的托盘中，并打开止流夹，调整至虹吸状态；③当血浆融化至剩余40～50 mL血浆及白色冷不融物时，关闭止流夹，热合断开，并迅速将其置于血浆速冻机中。
, 百拇医药
1.4 质控科常规抽检
2011年1月～2014年1月期间，每月随机抽检4袋，连续36个月，共计抽检144袋，每袋产品检测内容包括容量及Ⅷ因子、纤维蛋白原含量。Ⅷ因子、纤维蛋白原含量检测按试剂盒操作说明进行。
1.5 不合格产品判断
国家质量标准要求来源于400 mL全血制备的冷沉淀 FⅧ≥80 IU，纤维蛋白原含量≥150 mg，我血液中心容量为标示量50(mL)±10%，容量超标或不足、Ⅷ因子及纤维蛋白原含量不符合国家标准[6]均视为不合格产品。
2 结果
2.1 抽检结果
2011年1月～2014年1月期间共抽检36批次144袋产品中，不合格产品共计17袋，总不合格率为11.8%，总合格率为88.2%，见表1。由表1中数据可知，冷沉淀合格率呈增加趋势。
, 百拇医药
表1 2011年1月～2014年1月期间冷沉淀质控结果不合格例数统计
2.2 虹吸法制备冷沉淀不合格产品检测结果
不合格产品共计17袋，每袋产品均不同批次，均为Ⅷ因子含量低于国家标准，具体每袋产品检测结果见表2。
表2 虹吸法制备冷沉淀不合格产品检测结果(x±s)
注：每袋冷沉淀为IU，由200 mL新鲜冰冻血浆制备而成，国家标准：FⅧ含量≥80 IU/U
3 讨论
冷沉淀是从新鲜冰冻血浆中提取、低温下不溶解的血浆蛋白部分，主要含有第Ⅷ因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子、第XⅢ因子以及纤维结合蛋白等成分，是临床常用的血液成分之一。目前制备冷沉淀常用的方法有传统离心法和水浴虹吸法。由于传统离心法需要在4℃冰箱长时间缓慢融化至一段时间后，再进行离心分离，耗时长，Ⅷ因子衰减过多，再加上离心时不可避免使温度上升，从而导致Ⅷ因子丧失过多，最终使所制备的冷沉淀制品合格率较低[7-9]，难以满足临床需求。而虹吸法制备冷沉淀具备操作简单、制备时间短、温度恒定、Ⅷ因子含量高等优点，近年来该方法受到很多采供血机构的青睐。尽管虹吸法制备冷沉淀有诸多优点，笔者发现仍然有不合格产品出现，对不合格产品进行分析，有利于今后工作的改进，整体提高冷沉淀的质量，从而有利于临床患者的治疗。
, 百拇医药
从抽检结果看，纤维蛋白原含量合格率为100%，不合格原因主要为Ⅷ因子含量不足，总不合格率为11.8%。纤维蛋白原是较为稳定的凝血因子，冷沉淀的制备温度和制备时间对其影响较少，因此抽检合格率为100%，与李雪梅等[7]的报道一致。Ⅷ因子为不稳定凝血因子，主要参与内源性凝血过程，能形成凝血活酶，加速凝血因子Ⅹ活化，加快内源性凝血过程，Ⅷ因子含量不足直接影响着冷沉淀的临床应用效果。血液离体后，影响不稳定凝血因子质量的因素有多种，温度、时间、工作人员的操作方式等都能影响[10-13]。冷沉淀为新鲜冰冻血浆的衍生制品，新鲜冰冻血浆的质量也直接影响着冷沉淀的质量。制备新鲜冰冻血浆需要的全血，不仅要求符合制备成分血的要求，还需要在采血源头加以控制，要求一针穿刺成功、采血顺畅的全血，如果穿刺不顺畅、采血时间过长，可能会启动献血者的凝血机制，引起全血中的凝血因子含量异常，这种全血不宜制备新鲜冰冻血浆，在血液采集时，应对此类血液给予标识，以避免制备成新鲜冰冻血浆；另外，制备新鲜冰冻血浆的原料血即新鲜全血，应尽快放在4℃冰箱保存，尽可能减少不稳定凝血因子效价降低。全血分离制备出新鲜液体血浆后，要迅速在-65℃以下的速冻机中冻成固体状态，然后保存在-20℃以下的冰箱中。如果新鲜液体血浆在室温存放时间过长，也会影响血浆中不稳定凝血因子含量。冷沉淀制备过程中，影响不稳定凝血因子质量的因素也是多方面的，融化温度、时间都会影响冷沉淀的质量[14，15]。制备冷沉淀应使用专用低温水浴融化箱，微电脑能把温度控制在1～6℃，并能较好地控制融化速度，这些是保证冷沉淀质量的重要因素之一。冷沉淀制备好后，应尽快放置在-65℃以下的速冻机中冻成固体状态，速冻是保存凝血因子Ⅷ的关键步骤，速冻时，要把冷沉淀逐袋摆平，不要重叠堆放。临床患者输注冷沉淀时，重症患者常常需要一次性输入多袋产品以保证疗效，如果容量过多就会不可避免地增加患者的心脏负担或循环血容量。因此容量控制也很重要，要求工作人员制备时严把质量关，每袋产品都要用电子秤称重，以避免每袋冷沉淀容量过多。, 百拇医药(单泓 王姣杰)