1.2.4 杂交瘤细胞筛选及克隆化培养 采用间接ELISA法对融合后的细胞进行阳性杂交瘤细胞筛选，将筛选出来的细胞进一步使用有限稀释法进行克隆，然后进行扩大培养，收集并冻存，对其进行鉴定。

    1.2.5 单克隆抗体的制备及效价测定 选择20只小鼠，使用1 mL注射器将0.5 mL液体石蜡注入小鼠腹腔，培养1周后，将杂交瘤细胞注射进入小鼠腹腔，剂量为(1～2)×106个/只，1周后观察小鼠腹腔腹水生成情况，使用注射器抽取1～2 mL腹水，离心，取上清液。采用间接ELISA法测定效价，以A值大于阴性的2.1倍的稀释比例的倒数为该抗体效价，-20℃冻存腹水。

    1.2.6 单克隆抗体的纯化及亚类鉴定 使用硫酸铵盐析法和G蛋白层析法对小鼠腹水进行纯化，按照小鼠单克隆抗体亚型试剂盒说明书进行操作鉴定。

    1.3 统计学方法

    使用SPSS21.0软件包对数据进行处理，计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1细胞融合及筛选

    通过细胞融合、培养、筛选、克隆等，最后筛选出1株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株，命名为N5B4。见表1。

    2.2单抗的最大稀释度和腹水效价的测定

    细胞培养上清液体效价为1∶5000，腹水效价为1∶100万 ......