胥 威 卢永平 韩维田▲ 宋方田.辽宁省计划生育科学研究院 辽宁省生殖健康重点实验室，辽宁沈阳 003；.辽河油田总医院妇婴医院，辽宁盘锦 400

    以特异性引物延伸为基础的非综合征唇腭裂易感基因芯片技术

    胥威1卢永平1韩维田1▲宋方田2

    1.辽宁省计划生育科学研究院辽宁省生殖健康重点实验室，辽宁沈阳110031；2.辽河油田总医院妇婴医院，辽宁盘锦124010

    [摘要]目的设计一种适合检测非综合征唇腭裂(NSCL/P)相关大量单核苷酸多态性(SNP)的基因芯片。方法直接测序法验证基因芯片的准确性，重复检测部分样品验证基因芯片的重复性。结果本研究设计了一种以特异性引物延伸为基础的，适合检测NSCL/P大量相关SNP的，快速、有效、方便、经济、高通量的基因芯片。结论这种基因芯片为临床NSCL/P基因诊断提供一种新型的、灵敏度高、操作简单的技术手段。

    [关键词]基因芯片；特异性引物延伸；非综合征唇腭裂；单核苷酸多态性

    NSCL/P相关SNP的检测方法很多，包括限制性内切酶酶切法、质谱、直接测序、SNPshot等[1]。这些方法仅适合检测少量SNP，成百上千的SNP检测就比较困难。而NSCL/P的发病与大量SNP密切相关。本研究设计了一种适合检测NSCL/P相关SNP的且快速、方便、有效、经济、高通量的基因芯片。

    1 材料与方法

    1.1材料来源

    选择2010年7月～2012年7月间经中国医科大学附属口腔医院医师确诊的NSCL/P患者50例(男27例，女23例，年龄1～35岁，平均9.96岁)，均签署了知情同意书。

    1.2仪器及试剂

    点样仪(Nano-Plotter 2.1，GeSiM)，GenePix 4000B共聚焦激光扫描仪(Axon Instruments)；芯片探针和特异性延伸引物及阳性对照(南京生物科技有限公司)见表1。多重PCR试剂盒(Takara)，血液基因组DNA提取试剂盒(TIANGEN)，EXOI及碱性磷酸酶(Takara)，VentR(exo-)DNA聚合酶(NEB) ......