钩藤碱对痴呆模型小白鼠学习记忆的干预作用研究(3)
上述切片经二氨基联苯胺显色处理后,β淀粉样蛋白及β-淀粉样蛋白前体显黄色。采用磷酸缓冲液替代一抗(primary antibody),以作为实验的阴性对照。在β-淀粉样蛋白前体等染色切片的小鼠脑部皮层以及海马区域各取三个视野,采用病理切片分析系统分析各视野范围内β-淀粉样蛋白前体及淀粉样蛋白的光密度均值以及具有阳性的细胞数目。1.4.4 采用逆转录PCR测定BACE和APP mRNA 按Trizol试剂说明提取细胞总RNA,并检测RNA完整性和纯度,利用cDNA逆转录试剂盒将RNA逆转录成cDNA。依据美国国家生物技术信息中心信息银行的小鼠脑内β位点APP裂解酶(BACE)、β-淀粉样蛋白前体(AβPP)及淀粉样蛋白(Aβ)的序列,以Primer premier 5.0软件(加拿大Premier公司)来设计各蛋白上下游的引物相应序列。
BACE上游引物为5’-TGGGCTTCTGTCTTGGAG--3’,下游引物为5’-TATG CGATGCGAATGTTT-3’;APP上游引物为5’- AGATTGCGATCG CGTACTCT-3’ ......
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