石蜡包埋胃镜组织幽门螺杆菌菌体DNA探索性研究(2)
从FFPE组织中提取菌体DNA有助于追踪长时间的肿瘤分子标志的改变,利于回顾性研究[12]。但我们对菌体DNA提取的阳性率并不是100%的,尽管在提取菌体DNA之前我们对H.pylori进行了特染,选择了H.pylori阳性的标本。考虑的主要原因为经过石蜡包埋容易造成DNA不可逆降解、碱基与组蛋白交联以及苯、寡聚核苷酸片段等一些PCR抑制剂的存在,这使PCR扩增成为难题[13-15]。在应用传统PCR方法无法从FFPE组织中扩增出清晰的电泳条带时,我们选择两对嵌套的引物,即应用巢式PCR后,获得了清晰条带,增加了可重复性,提高了特异性。另外,我们还发现其他一些策略可提高DNA产量:①在熔蜡的次数选择两次效果最好,次数过少蜡不能被完全溶解掉,次数过多易造成DNA的损失,而且第一次根据包埋组织石蜡的熔点的温度不同,选择65℃水浴融蜡2 h比较彻底 ......
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