稳定沉默TIPE2后削弱PolyI:C诱导的人单核/巨噬细胞凋亡(2)
1 材料与方法1.1 细胞培养和TLR激动剂处理
人THP-1细胞购自中国科学院上海细胞库。新生牛血清,DMEM培养基和0.25%胰蛋白酶购自美国Life technology公司;人TLR1-9激动剂购自InvivoGen公司,抗人TIPE2和Caspase-8抗体购自Abcam公司。其余试剂均为国产分析纯。THP-1细胞培养在含有10%胎牛血清以及100 U/mL青-链霉素霉素的DMEM培养液中,置于含有5%CO2,37℃培养箱中,每隔2~3天换液。取对数生长期细胞进行实验。细胞计数后将试剂盒中的TLR1-9特异性激动剂用培养液稀释后使用,终浓度分别为0.1 μg/mL和1 μg/mL,孵育24 h后,Trizol裂解细胞,提取RNA,按照方法1.6中的描述检测TIPE2 mRNA表达水平。
1.2细胞抑制实验
细胞抑制率使用四甲基偶氮噻唑蓝法(methlthiazoletrazolium assay ......
您现在查看是摘要页,全文长 3861 字符。