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编号:12870081
稳定沉默TIPE2后削弱PolyI:C诱导的人单核/巨噬细胞凋亡(2)
http://www.100md.com 2016年6月5日 《中国现代医生》 2016年第16期
     1 材料与方法

    1.1 细胞培养和TLR激动剂处理

    人THP-1细胞购自中国科学院上海细胞库。新生牛血清,DMEM培养基和0.25%胰蛋白酶购自美国Life technology公司;人TLR1-9激动剂购自InvivoGen公司,抗人TIPE2和Caspase-8抗体购自Abcam公司。其余试剂均为国产分析纯。THP-1细胞培养在含有10%胎牛血清以及100 U/mL青-链霉素霉素的DMEM培养液中,置于含有5%CO2,37℃培养箱中,每隔2~3天换液。取对数生长期细胞进行实验。细胞计数后将试剂盒中的TLR1-9特异性激动剂用培养液稀释后使用,终浓度分别为0.1 μg/mL和1 μg/mL,孵育24 h后,Trizol裂解细胞,提取RNA,按照方法1.6中的描述检测TIPE2 mRNA表达水平。

    1.2细胞抑制实验

    细胞抑制率使用四甲基偶氮噻唑蓝法(methlthiazoletrazolium assay ......
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