脂氧素A4及其受体对急性肺损伤Na+—K+—ATP酶的影响(2)
1.5 检测Na+-K+-ATP酶α1、β1亚基蛋白表达肺组织匀浆后提取蛋白并定量,加蛋白上样缓冲液,煮沸后保存。加入SDS-PAGE胶孔中进行电泳、转膜、封闭。最后加入抗Na+-K+-ATP酶α1和β1抗体(1∶1000),4℃过夜;第2天洗膜,加入二抗(1∶5000),室温孵育1 h;洗涤,ECL显影、曝光。
1.6 Na+-K+-ATP酶活性检测
ATP酶分解ATP为ADP、AMP和Pi,通过测定Pi的量判断ATP酶的活性。ATP酶活性单位以每小时每毫克蛋白分解ATP产生1 mmol Pi的量定义为一个ATP酶活力单位。按微量Na+-K+-ATP酶试剂盒(南京建成)说明书进行测定。
1.7 统计学处理
采用SPSS13.0统计学软件进行分析处理,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,多组样本比较进行方差齐性检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 油酸肺损伤模型建立
对照组肺组织结构清楚 ......
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