白颉 郭慈浩 罗智强 陈栋

    1.浙江省舟山出入境检验检疫局，浙江舟山316000；2.浙江省温州市疾病预防控制中心，浙江温州325000

    四种提取诺如病毒和副溶血性弧菌总RNA方法的比较

    白颉1郭慈浩1罗智强1陈栋2

    1.浙江省舟山出入境检验检疫局，浙江舟山316000；2.浙江省温州市疾病预防控制中心，浙江温州325000

    目的比较四种联合提取诺如病毒和副溶血性弧菌总RNA的方法。方法使用Trizol法、磁珠法、QiagenTMRNA Mini Kit和柱式RNA抽提试剂盒分别提取诺如病毒和副溶血性弧菌的总RNA，经核酸测定仪检测RNA的质量，并用RT-PCR法对四种提取方法进行比较。结果QiagenTMRNA Mini Kit的提取效率最佳，对PCR的反应影响最小。磁珠法其次，但是磁珠法提取出的总RNA纯度也较高。Trizol法和柱式法总RNA抽提试剂盒所获得的总RNA比上述两者低，且存在不同程度的污染。经随机区组方差分析显示，四种提取方法之间存在显著性差异，F浓度=11.313；F(A260/A280)=15.093；F(A260/A230)=11.155，P均<0.05。结论四种试剂的实际提取效率存在差异，应根据不同的样本情况选择合适的试剂。

    诺如病毒；副溶血性弧菌；总RNA；逆转录PCR；提取

    RNA是微生物中重要的遗传分子，获取高品质的RNA是样本前处理的基本要求，是后续进行分子生物学实验提供优质模板的前提。虽然国内已经建立了相对成熟的RNA提取方法，但是缺乏联合提取病毒和细菌两种不同病原微生物RNA的相关报道。目前国内市场上常见的RNA提取试剂有Qiagen的RNA MiniKit，PROGEMA的SV TotalRNA Isolation System，上海生工的柱式Trizol总RNA抽提试剂盒以及上海之江的磁珠柱RNA抽提试剂盒。除此之外，张倩等[1]用改良SDS/酚法提取总RNA，提取得到的产物完整性强、质量好、产率高，适合进一步的分子生物学实验研究。但是不同的提取原理以及不同的品牌对RNA的提取浓度和纯度有着巨大的差异。而提取高质量的RNA用以研究病原微生物的毒力基因表达、致病性和环境适应性变得尤为重要。本研究尝试以诺如病毒和副溶血性弧菌的总RNA提取为例，使用Trizol法、磁珠法核酸提取试剂盒、QiagenTMRNA Mini Kit和柱式总RNA抽提试剂盒四种方法提取总RNA，经核酸测定仪检测RNA的质量，并用RT-PCR法对四种提取方法进行比较，寻找出更适合用于两种病原体总RNA的提取 ......