1.2 HGC27细胞培养和转染

    HGC27细胞生长于含有10%灭活胎牛血清的1640培养基中(含有100 U/mL青霉素和50 μg/mL链霉素)，37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。质粒转染按照Lipo 2000转染试剂说明书进行操作。实验分为未处理组、pcDNA3.1空载体转染组、pcDNA3.1A-flag-RACK1质粒转染组三组。细胞培养48 h后收集，进行后续实验。

    1.3 Western-blotting检测HGC27细胞中WEE1蛋白表达

    收集并提取各组细胞总蛋白，测蛋白浓度后煮沸，冷却离心，10% SDS-PAGE电泳分离后，将蛋白转至硝酸纤维素膜上，3%BSA的TBS(pH7.4)封闭2 h，分别与anti-WEE1抗体(1∶500稀释)和β-Actin(1∶1000稀释)4℃过夜温育。TTBS洗膜3次，HRP偶联的山羊抗鼠IgG(1∶5000稀释)室温温育2 h，洗膜3次，ECL发光法进行显色，实验重复3次。

    1.4 免疫共沉淀验证在HGC27细胞内RACK1和WEE1存在相互作用

    收集培养48 h后HGC27细胞 ......