组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK—228诱导人舌癌细胞的凋亡研究(2)
1.2.3 DNA Ladder試剂盒检测凋亡 选择生长旺盛Tac-8113细胞,使细胞浓度为3×105个/mL置于25 cm2细胞瓶中,待细胞贴壁后,设立对照组(不加药)及实验组,选择实验组药物浓度为2.0 μg/mL。作用48 h后,离心收集2×106个细胞置于1.5 mL Eppendorf管中,PBS液轻轻清洗,将沉淀物中滴入Lysis Buffer 100 μL,实验过程避光操作,10 s震荡离心保留上清液,按说明书进行以下操作:滴入20 μL SolutionA、EnzymeA,轻轻摇匀在55℃恒温1 h,加入EnzymeB 20 μL,37℃恒温水域置1 h,滴入Precipitant 130 μL、冰乙醇950 μL,-20℃处理12 h后收集DNA,DNA用70%冷乙醇洗并干燥10 min,滴入TE Buffer 10 μL、Loading Buffer 2 μL,配置1.5%琼脂糖凝胶,每孔加入20 μL试验样品,5 V/cm下电泳3 h ......
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