miR—519d靶向CDKN1A/p21调控宫颈癌细胞增殖的初步研究(3)
2.3 下调miR-519d活性对于宫颈癌细胞周期的影响流式细胞术检测发现，miR-519d inhibitor转染宫颈癌HeLa和SiHa细胞后能阻滞细胞周期进程。如图3所示，与NC组相比，miR-519d inhibitor转染宫颈癌HeLa和SiHa细胞后，G1期比例明显升高，而S期细胞比例显著下降(P<0.05)，而G2/M期无明显差异，说明下调miR-519d的活性可能通过影响细胞周期G1/S监测点而发挥作用。
2.4 p21是miR-519d的直接靶基因
为了进一步探讨miR-519d影响宫颈癌细胞增殖、周期的具体机制，采用Targetscan等生物信息学软件预测其靶基因，发现p21与细胞周期调控相关，并根据结合位点设计双荧光素酶报告质粒的插入序列(图4a)。荧光素酶报告实验结果提示，与NC组相比，HeLa和SiHa细胞中，miR-519d mimic可显著抑制p21野生型3′ UTR的荧光素酶活性，而对种子序列突变型3′ UTR的荧光素酶活性没有明显的抑制作用(图4b) ......
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