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编号:13284159
miR—122调控LAMC1表达与肝癌细胞迁移侵袭相关性研究(2)
http://www.100md.com 2018年8月5日 《中国现代医生》 2018年第22期
     1 材料与方法

    1.1 药品与试剂

    美国培养物保藏中心(ATCC,Manassas,VA)购买人正常肝细胞株LO2、肝癌细胞株HepG2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721。miR-122质粒、LAMC1及Real-Time-PCR配套引物(广州RiboBio公司);CCK-8试剂盒(日本同仁化学研究所);TUNEL凋亡试剂盒(上海碧云天生物有限公司)。

    1.2 细胞培养

    人正常肝细胞株LO2和肝癌细胞株HepG2用DMEM+10%胎牛血清、37°C、5%CO2细胞培养箱中培养,高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721细胞用RMPI 1640+10%胎牛血清、37°C、5%CO2细胞培养箱中培养;3种细胞正常传代后提取细胞样品、PBS洗涤2次后转移入EP管中,冰上裂解15 min后超声破碎细胞,离心15 min,取上清液作为蛋白样品。

    1.3 细胞miR-122mimics质粒转染[13]

    慢病毒质粒(Lv-miR-122)与对照scarmble RNA的病毒质粒(Lv-Ctrl)连同包装质粒pRRE、pRSV-REV、pCMV-VSVG通过磷酸钙转染法转到293T细胞 ......
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