1.2.6 流式细胞术 取小鼠脾脏，剔除脂肪组织后剪成5 mm×5 mm小块，收集脾脏细胞悬液，300×g，10 min，收集细胞沉淀，无血清培养基重悬后过200目筛网；将细胞悬液慢慢滴入等体积的分离液中，水平离心，500×g，20 min，收集第二层白色细胞悬液，弃红细胞层。5倍体积洗涤液重悬细胞，300×g，5 min，漂洗细胞2遍，100 μL staining bμffer重悬细胞，置于冰上，待孵育抗体。同时加入CD49b-APC和CD3-FITC抗体，室温避光孵育30 min。另设CD49b-APC单染组和CD3-FITC单染组和空白组(不加任何抗体)。300×g，5 min，离心收集上述组别的细胞沉淀；500 μL staining buffer重悬细胞，以FL-1A通道检测CD3-FITC信号，FL-4A通道检测CD49b-APC信号。空白组用以确定阴性区域，相应一抗单染组确定阳性表达区域，NK细胞为CD49b阳性CD3阴性细胞(散点图中UL区域)。

    1.3 统计学处理

    应用SPSS 19.0统计软件分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，对于单变量分析中，分类变量采用χ2检验及Mann-Whitney U检验，连续变量用两两t检验。P<0.05为差异有统计学意义 ......