抑郁模型大鼠脑脊液miR-16与中缝核miR-16、5-羟色胺转运体表达的关联性研究(2)
1.6 脑脊液和中缝核miR-16测定采用实时荧光定量PCR法测定。首先,提取脑脊液、中缝核总RNA(北京天根生化科技有限公司),取2 μg RNA进行反转录获得cDNA,随后进行实时荧光定量PCR扩增。目的基因miR-16的上游引物与其本身序列一样,为5’-TAGCAGCACGTAAATTGGCG-3’。将U6做为校正基因,上游引物序列为5’-ACGCAAATTCGTGAAGCGTTCCAT-3’。miR-16与U6的下游引物相同,由试剂盒自带[miRcute miRNA荧光定量检测试剂盒(SYBR Green),北京天根生化科技有限公司]。PCR扩增程序为:94℃预变性 2 min,94℃变性20 s,52℃退火30 s,72℃延伸30 s,循环40次。根据扩增曲线获得Ct值,并将其用对应的U6值进行校正。
1.7 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件分析数据。糖水消耗率、旷场实验水平得分垂直得分、脑脊液miR-16、中缝核miR-16、中缝核SERT水平为计量资料,对照组与模型组之间的比较采用独立样本t检验;脑脊液miR-16、中缝核miR-16、中缝核SERT水平为连续型计量资料 ......
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