慢性乙型肝炎患者外周血调节性T淋巴细胞检测的临床意义分析(2)
1.2 方法1.2.1仪器与试剂 GF 500流式细胞计数仪;高速冷冻离心机;连续可调移液器;FZQ-2型漩涡混合器;淋巴细胞分离剂;CD3+、CD4+、CD8+及CD4+ C25+试剂。
1.2.2 检测方法 采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管采集全血1 mL,吸取CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞三色试剂10 μL;吸取CD4+ C25+试剂10 μL,分别放入洁净试管中,加入全血50 μL,充分混合均匀,放于避光、室温处,时间为20 min。添加红细胞裂解液1 mL,充分混合均匀,放于避光、室温处,时间为15 min。肉眼可见试管中红色液体透亮,表示红细胞彻底裂解,添加磷酸缓冲盐溶液2 mL,充分混合均匀,给予离心处理,离心率1000 r/min,时间为5 min,除去上层清液,用吸水纸吸干管口残余液体。向试管底部白色沉淀中添加磷酸缓冲盐溶液0.5 mL,充分混合均匀,给予流式细胞计数仪检测。
1.3 观察指标
比较两组检验结果。检验指标:调节性T淋巴细胞(Treg)、Ⅰ型调节性T淋巴细胞(TrI)、辅助性T淋巴细胞17(Th17)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+ C25+ ......
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