siRNA-P300鞘内注射对神经病理性疼痛大鼠模型HIF-1α/VEGF和ERK通路的影响(3)
1.2.4 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测P300 mRNA表达水平 转染培养14 d后处死大鼠并采集各组大鼠腰段脊髓并置于-80℃超低温冰箱保存待测。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测P300 mRNA表达水平，取冻存脊髓，液氮中研磨，加入10 μL Trizol试剂提取总RNA，应用紫外分光光度计检测RNA浓度及纯度，参照反转录试剂盒合成cDNA，qRT-PCR反应体系共20μL：SYBR Green Mstermix 10 μL，cDNA样本1 μL，引物各0.5 μL，ddH2O 8 μL。P300上游引物5'-GCCAAGTATGCCAACCCTAA-3'，下游引物5'-TGTTCATTTGCTGAGCTTGG-3';GAPDH上游引物-TGGTGAAGGTCGGTGTGAAC-3'，下游引物5'-GGTGGTGAAGACGCCAGTAG-3'。反应条件：95℃ 5 min，95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，共32个循环 ......
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