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编号:13480706
慢病毒载体介导的Nrf2表达下调对肝星状细胞生物学行为的影响(1)
http://www.100md.com 2020年5月5日 《中国现代医生》 202013
慢病毒载体介导的Nrf2表达下调对肝星状细胞生物学行为的影响,HSC-T6细胞,PI3K-Akt通路,凋亡
     [摘要] 目的 觀察重组慢病毒载体介导Nrf2表达下调对肝星状细胞生物学行为的影响,同时探讨其可能的作用机制。 方法 利用重组DNA技术将特异性shRNA序列插入慢病毒表达载体pGLV3.GFP中,形成pGLV3.GFP.Nrf2.shRNA,将其转染至293T细胞中,随后进行病毒包装、滴度测定、转染率计算。采用实时荧光定量、Western blot测定转染肝星状细胞株(HSC-T6细胞)Nrt2 mRNA及蛋白的表达情况,利用Tunel染色法检测HSC-T6细胞的凋亡情况,同时对HSC-T6细胞中PI3K、Akt、p-Akt、p-Bad、Bcl-2、Bax蛋白水平进行测定。 结果 构建的重组病毒载体 LV3-H1-GFP-shRNA可有效感染293T细胞。激光共聚焦显示空白组细胞凋亡率低于A组和B组,与A组比较,B组的细胞凋亡率降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR法结果显示空白组Nrf2 mRNA水平高于A组和B组(P<0.05) ......
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