台州地区非结核分枝杆菌流行趋势研究(2)
1.2 方法1.2.1 标本处理 向标本(如痰液)中加入等体积10%NaOH溶液,涡旋振荡,根据液化情况考虑延长液化时间或增加0.5~1.0 mL 10% NaOH溶液。
1.2.2 核酸提取 ①将核酸提取管10 000 rpm离心1 min备用;②将液化后的样品取1 mL上清到1.5 mL离心管中,12 000 rpm离心5 min,弃上清;③向离心管中加入1 mL生理盐水,同一份样品用1 mL生理盐水转移至一个离心管中,旋涡振荡混匀,12 000 rpm 离心5 min,弃上清;④向每个离心管中加入50 μL核酸提取液,用移液器吹吸沉淀,将液体和沉淀一起转移到核酸提取管中;⑤将核酸提取管置于振荡器上,最大转速振荡5 min;⑥将核酸提取管置于95℃金属浴中,加热5 min;⑦10 000 rpm离心1 min,备用。⑧从4℃冰箱取出PCR扩增试剂,向每管加入2 μL模板DNA。每份PCR反應体系总体积为20 μL。
1.2.3 核酸扩增 先将反应管放入PCR仪中进行PCR扩增反应 ......
您现在查看是摘要页,全文长 4195 字符。