李君 朱嘉晋 邓雨萍 吴文鹤

    [摘要] 目的 优化线粒体DNA(mtDNA)提取和纯度鉴定方法以满足线粒体基因组测序的要求。方法 利用简化的蔗糖密度梯度离心法、DNA酶Ⅰ并结合质粒提取试剂盒提取纯化mtDNA、尽量降低核DNA(nDNA)污染的可能。获得的mtDNA经NanoDrop检测、琼脂糖凝胶电泳和荧光定量PCR绝对定量法测定nDNA/mtDNA拷贝数比值等鉴定其纯度。结果 从小鼠肝脏和大脑组织中提取纯化得到mtDNA产率分别为311.7 μg/g和59.1 μg/g，其A260/280均介于1.8～2.0，A260/230浓度均大于2.0，荧光定量PCR绝对定量法测定nDNA/mtDNA拷贝数比值均低于0.005%。结论 本研究优化了mtDNA提取和鉴定方法，得到的高纯度mtDNA适用于后续线粒体基因组测序等分子生物学研究。

    [关键词] 线粒体DNA;提取;纯化;核DNA

    [中图分类号] R394.3? ? ? ? ? [文献标识码] A? ? ? ? ? [文章编号] 1673-9701(2022)04-0040-04

    [Abstract] Objective To optimize mitochondrial DNA (mtDNA) extraction and purity identification methods to meet the requirements of mitochondrial genome sequencing. Methods Simplified sucrose density gradient centrifugation ......