朱婷婷，厉挺，赵叶芳

    绍兴第二医院内镜中心，浙江绍兴 312000

    化疗是胃癌的重要治疗手段之一，术前和术后联合化疗在提高胃癌患者生存率方面具有良好疗效。顺铂是临床应用最普遍的化疗药物，但其耐药性仍是胃癌患者有效化疗和改善预后的最大障碍[1]。探讨胃癌顺铂耐药的机制对克服胃癌化疗耐药具有重要意义。研究发现肿瘤组织中大量长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)表达异常，lncRNA可调控不同信号通路进而影响肿瘤细胞的增殖、转移、耐药和凋亡，是肿瘤治疗和化疗增敏的潜在靶点[2-3]。研究报道lncRNA LHFPL3-AS1 在黑色素瘤中表达上调，可抑制黑色素瘤干细胞凋亡[4]。LHFPL3-AS1 下调可明显抑制口腔鳞癌细胞的增殖和转移，抑制顺铂耐药[5]。然而，LHFPL3-AS1 在胃癌中的具体作用尚不清楚。靶基因预测显示miR-515-5p 是LHFPL3-AS1 的潜在靶点。既往研究证实上调miR-515-5p 可显著降低胃癌细胞活力，抑制集落形成和侵袭能力[6]。miR-515-5p 通过靶向Notch1 明显抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖，增强药物敏感性[7]。基于上述背景，本研究探讨LHFPL3-AS1 靶向miR-515-5p 对胃癌顺铂耐药细胞恶性行为的影响，旨在为克服胃癌顺铂耐药提供有效靶标。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂

    胃癌亲本细胞 HGC-27 及耐药细胞 HGC-27/DDP、人正常胃黏膜细胞GES-1(中国典型培养物保藏中心)；PrimeScript 逆转录试剂盒、SYBR Premix Ex TaqⅡ试剂盒(大连Takara 生物公司，批号：20181123)；细胞计数试剂盒(CCK-8)(南京恩晶生物科技公司，批号：20190510)；荧光素酶报告载体、miRNA 模拟物(mimic)、miRNA 抑制物(inhibitor)、小干扰RNA(si-RNA)(广州锐博生物公司，批号：20171105、20190326、20180611、20171025)；Transwell 小室(北京优尼康生物公司，批号：20180520)；兔源E 钙黏蛋白(E-cadherin)多克隆抗体(AF6759)、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(A0208)、兔源甘油醛-3-磷酸(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)单克隆抗体(AF1186)、兔源N 钙黏蛋白(N-cadherin)多克隆抗体(AF0243)(上海碧云天生物公司 ......