陈亮，唐坚，褚永权，叶剑宏，沈超，钱晓宇

    大黄素通过减少DNMTs的表达对胰腺癌细胞抑癌基因ppENK发挥去甲基化作用研究

    陈亮，唐坚，褚永权，叶剑宏，沈超，钱晓宇

    嘉兴市第一医院头颈外科，浙江嘉兴 314000

    研究大黄素对胰腺癌细胞Panc1 DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases，DNMTs)的影响，及其对抑癌基因前脑啡肽原(pre-proenkephalin，ppENK)启动子区CpG岛的去甲基化作用，探讨大黄素是否可通过降低DNMTs的表达逆转ppENK的甲基化状态。CCK-8检测不同浓度大黄素对Panc1细胞生长的影响，探索最佳用药浓度，重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite genomic sequencing PCR，BSP)检测不同浓度大黄素对ppENK基因甲基化状态的影响，PCR和Western Blot检测ppENK及甲基转移酶DNMT1、DNMT3a的mRNA和蛋白表达情况。大黄素以时间梯度和浓度梯度依赖性抑制Panc1细胞生长，其半数最大抑制浓渡(half maximal inhibitory concentration，IC50)约为40μmol/L，大黄素可使ppENK甲基化状态减弱，非甲基化状态增强；可减弱DNMTs的mRNA和蛋白表达，增强ppENK mRNA和蛋白表达。大黄素可不同程度地使Panc1 ppENK抑癌基因去甲基化，使抑癌基因重新表达。大黄素抑制胰腺癌细胞生长和其去甲基化作用有关，推测大黄素发挥去甲基化作用和其抑制甲基转移酶表达相关。

    大黄素；胰腺癌；去甲基化；DNA甲基转移酶；重亚硫酸盐测序PCR

    胰腺癌是一种常见的恶性肿瘤，具有侵袭性强、早期症状不典型、术后易转移复发等特点。据国际癌症研究机构统计，胰腺癌的死亡率居第7位，发病率居36种常见恶性肿瘤的第14位[1]。另一项统计数据表明，美国2021年新增胰腺癌确诊病例60 430例，死亡病例48 220例，到2030年胰腺癌或将成为美国癌症相关死亡的第二大原因[2-3]。

    肿瘤发生、发展过程中的表观遗传修饰变化备受关注，表观遗传修饰主要包括：DNA甲基化和羟甲基化、染色质重塑、组蛋白甲基化和乙酰化、RNA干扰、基因组染色等。催化DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases，DNMTs)有DNMT1、DNMT3a和DNMT3b，进而形成5mC[4]。DNA甲基化修饰与转录失活、基因印记、X染色体失活密切相关，大量研究证据表明，DNA多重甲基化在多种恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用[5] ......