罗幸凯，黄丽丽

    南柴胡多糖理化性质及拮抗白细胞黏附研究

    罗幸凯，黄丽丽

    宁波市医疗中心李惠利医院药学部，浙江宁波 315000

    探究南柴胡多糖(polysaccharide，BP)的理化性质、溶液高级构象及拮抗P-选择素介导的细胞黏附能力。采用水提醇沉法制备BP，利用化学法(苯酚硫酸法、间羟基联苯法、Bradford法)、高效液相色谱、傅里叶红外光谱、刚果红染色和圆二色谱分析BP的理化性质及溶液高级构象，利用细胞黏附和蛋白互作实验评价BP拮抗P-选择素介导的细胞黏附活性。BP是相对分子质量为36.44kDa的酸性杂多糖，糖醛酸含量为19.33%，由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖5种单糖组成；BP在溶液状态下，不存在三股螺旋结构，分子具有明显的不对称性，但不对称性受浓度和温度影响；BP显著抑制P-选择素介导的HL-60与CHO-P细胞的黏附，并阻断P-选择素与P-选择素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1，PSGL-1)的相互作用。BP是由5种单糖组成的酸性多糖，能阻断P-选择素介导的白细胞黏附作用，具有开发成为新型抗炎药物的潜力。

    南柴胡；多糖；理化性质；溶液构象；P-选择素；抗炎

    柴胡是一味传统中药材，始载于《神农本草经》，至今已有上千年历史。《中国药典》2020年版规定本品为伞形科(北)柴胡(DC.)或狭叶(南)柴胡(Willd.)的干燥根，具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气等功效[1]。南柴胡广泛分布于内蒙古、江苏、安徽等地区，主要含有黄酮类、皂苷类、多糖类等活性化合物，具有抗炎、镇痛、解热、保肝等药理活性[2-3]。但关于南柴胡多糖(polysscharide，BP)的高级构象及其抗炎活性的研究报道较少，为丰富BP的结构信息、发掘其生物活性，本研究运用多种化学和光谱分析方法揭示BP的理化性质及溶液高级构象，并利用静止黏附、平行板流动小室和体外蛋白互作实验评价其拮抗P-选择素介导的白细胞黏附能力，为促进南柴胡资源的开发利用提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 BP的制备

    采用水提醇沉法制备BP。取适量脱脂南柴胡粉末，沸水浸提3次(:=1 : 20)，每次3h。合并提取液，过滤，减压浓缩。浓缩液中缓慢滴加95%乙醇至终浓度为80%，4℃静置过夜，经离心处理后收集沉淀，真空冷冻干燥。采用反复冻融法和Sevag法除去蛋白质，得BP。

    1.2 理化性质分析

    采用苯酚-硫酸法测定糖含量；采用间羟基联苯法测定糖醛酸含量；蛋白含量测定采用考马斯亮蓝法；采用TENSOR27型傅里叶变换红外光谱仪(德国Bruker公司) ......