[摘要] 目的 探讨靶向细胞间质上皮转化因子(cellular-mesenchymal epithelial transition factor，c-Met)的嵌合抗原受体NK(chimeric antigen receptor-NK，CAR-NK)细胞在体外对胃癌细胞的抑制和杀伤作用。方法 采用流式细胞术(flow cytometry，FCM)、蛋白质免疫印迹法、反转录荧光定量聚合酶链反应检测胃癌细胞株(MKN-45、GTL-16和NCI-N87)和胃黏膜上皮细胞GES-1中c-Met的蛋白和核酸水平表达情况；通过细胞免疫荧光实验检测c-Met CAR对高表达c-Met的胃癌细胞株GTL-16的特异性识别作用；通过慢病毒载体构建靶向c-Met的CAR-NK细胞，并应用FCM检测CAR-NK细胞的感染效率和细胞表型；通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)实验和酶联免疫吸附试验检测c-Met CAR-NK细胞对胃癌细胞株和胃黏膜上皮细胞的杀伤效应。结果 在核酸水平和蛋白水平，c-Met均显著高表达于胃癌细胞株GTL-16和MKN-45，低表达于胃癌细胞株NCI-N87和胃黏膜上皮细胞GES-1。FCM结果显示c-Met CAR-NK感染率为(14.97±0.25)%，c-Met CAR病毒感染并未影响NK-92细胞的表型。细胞免疫荧光结果显示转染c-Met CAR质粒的Lenti X-293T细胞靶向结合至胃癌细胞GTL-16周围。LDH杀伤实验结果表明，c-Met CAR-NK相较于NK-92对高表达c-Met的胃癌细胞株GTL-16和MKN-45具有更显著的杀伤效果(Plt;0.05)。按照效靶比10∶1时c-Met CAR-NK与高表达c-Met的胃癌细胞株GTL-16和MKN-45共培养时，可显著释放出更多的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α和干扰素(interferon，IFN)-γ(Plt;0.05)。结论 本研究构建的c-Met CAR-NK细胞具有特异性识别并靶向杀伤高表达c-Met的胃癌细胞的能力，且有较强的杀伤效应功能，能释放出更多的TNF-α和IFN-γ ......