微孔板法测定乳粉中叶酸含量的前处理方法优化

    叶酸，是一类化学结构相似、生化特征相近的化合物统称，由蝶啶、对氨基苯甲酸和一个或多个谷氨酸结合而成，是维生素B复合体之一[1]。它具有促进骨髓中幼细胞成熟，改善血管内皮功能、预防心血管疾病等作用，缺乏叶酸可能引起人体巨红细胞性贫血以及白细胞减少症[2-3]。叶酸是乳粉中重要的营养物质之一，为了保障乳粉的质量安全，开展乳粉中叶酸的检验方法研究显得十分重要。

    叶酸常用的检测方法有比色法[4]、薄层层析法[5]、同位素放射免疫法[6]、色谱法[7]、微生物法等[8-9]。在我国的食品标准中，微生物法是检测食品中叶酸含量的主要方法。尤其是在传统的微生物法基础上微量化和简便化发展的微孔板法备受青睐[10]。但是由于乳粉的基质比较复杂，使用微孔板法进行叶酸检验时，前处理条件对实验结果的影响显著。本文通过考察微孔板法中提取温度、提取时间和离心转速等前处理条件对实验结果的影响，寻找最优的前处理条件，以利于保证测定结果准确可靠。

    仪器与试剂 仪器 电子天平(梅特勒PL2002)、酶标仪(Multiskan Mk3型)、生化培养箱(PHX-330H)、数 显 恒 温 水 浴 锅(HH-4)、pH计(Mettler Toledo FE20)、台式高速冷冻离心机(湘仪H1850R)。

    试剂 包被有鼠李糖杆菌的微孔板、叶酸培养基、叶酸标准品、叶酸缓冲液、无菌水。以上试剂均来自VitaFast Folic Acid 定量检测试剂盒

    磷酸盐缓冲液(0.05mol/L ......