1.3.3 抗体制备与纯化

    以研发的人工抗原新西兰雌性大白兔为研究对象，采用背部皮下多点注射的方式进行免疫。首次用弗氏完全佐剂乳化人工抗原免疫，间隔一定时间后进行加强免疫(佐剂为IFA)。每种抗原的免疫剂量是每只兔子1000μg，免疫间隔3周，收集得到的多抗血清用蛋白A亲和柱进行纯化，冻干后于-20℃环境下保存。

    1.3.4 ELISA方法的建立

    取1.0±0.01g均质后的蔬菜样品于50mL离心管中，加入5mL甲醇，充分涡动1min；4000rpm离心5min；取100μL上清液于新的离心管中，加入400μL样品稀释液，充分涡动30s；用于后续检测。

    用包被缓冲液稀释包被抗原，每孔加入100μL，37℃温育2h，倾去包被液，用洗涤液洗涤4次，每次30s，拍干；在每孔中加入200μL封闭液，37℃温育2h，倾去封闭液，用洗涤液洗涤4次，每次30s，拍干；依次将50μL各标准品工作液/样品溶液、80μL酶标抗体工作液加入对应的标准品/样本孔中，盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀，室温下(25±2℃)避光反应40min；洗涤4次，拍干；立即在每孔中加入100μL A、B混合液；盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀，室温下(25±2℃)，避光反应10～15min；揭开盖板膜，在每孔中加入50μL终止液，轻轻振荡酶标板10s，充分混匀；5min内用酶标仪在双波长450nm、630nm下读取酶标板吸光度值 ......