□ 宋文 丹东市食品检验检测中心

    □ 何鲁江 杭州诺威泰克生物技术有限公司

    目前，快速检测试剂条一般采用抗原抗体反应的原理来检测目标检测物。但是由于牛奶样本中蛋白质含量较高，容易干扰检测结果，且对于灵敏度要求高，普通的抗体无法达到现场检测灵敏度的要求。胶体金法采用受体结合的原理来检测目标物，由于受体结合的亲和力是抗原抗体结合亲和力的两个数量级以上，因此在牛奶中使用受体结合的原理来制备β-内酰胺高灵敏度检测试剂条成为一个有效的手段。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    阳性奶样、阴性奶样、酪蛋白、Tris、BSA、Borax等化学试剂(采购自Sigma)。镍柱(GE life)、PET-30a质粒(通用生物)、β-内酰胺BSA偶联物(购自杭州隆基生物)。

    1.2 仪器与设备

    高速冷冻离心机(湘仪)、摇床(湘仪)、蛋白分离柱(Bio-Rad)、分光光度计(新世纪)。

    1.3 方法

    1.3.1 重组β-内酰胺受体制备

    查阅NCBI上β-内酰胺的序列，筛选出适合大肠杆菌表达系统的序列如下：

    ACAGGCACTCGCTTTGGAACAGATTTAGCGAAGGAAGCTA AGAAGGTTCATCAAACCACCCGTACAGTTCCTGCCAAACGTGGG ACTATTTATGACCGAAATGGAGTCCCGATTGCTGAGGATGCAAC CTCCTATAATGTCTATGCGGTCATTGATGAGAACTATAAGTCAGC AACGGGTAAGATTCTTTACGTAGAAAAAACACAATTTAACAAGG TTGCAGAGGTCTTTCATAAGTATCTGGACATGGAAGAATCCTAT GTAAGAGAGCAACTCTCGCAACCTAATCTCAAGCAAGTTTCCTT TGGAGCAAAGGGAAATGGGATTACCTATGCCAATATGATGTCTA TCAAAAAAGAATTGGAAGCTGCAGAGGTCAAGGGGATTGATTT TACAACCAGTCCCAATCGTAGTTACCCAAACGGACAATTTGCTT CTAGTTTTATCGGCCTAGCTCAGCTCCATGAAAATGAAGATGGA AGCAAGAGCTTGCTGGGAACCTCTGGAATGGAGAGTTCCTTGA ACAGTATTCTTGCAGGGACAGACGGCATTATTACCTATGAAAAG GATCGTCTGGGTAATATTGTACCCGGAACAGAACAAGTTTCCCA ACGAACGATGGACGGTAAGGATGTTTATACAACCATTTCCAGCC CCCTCCAGTCCTTTATGGAAACCCAGATGGATGCTTTTCAAGAG AAGGTAAAAGGAAAGTACATGACAGCGACTTTGGTCAGTGCTAA AACAGGGGAAATTCTGGCAACAACGCAACGACCGACCTTTGAT GCAGATACAAAAGAAGGCATTACAGAGGACTTTGTTTGGCGTG ATATCCTTTACCAAAGTAACTATGAGCCAGGTTCCACTATGAAA GTGATGATGTTGGCTGCTGCTATTGATAATAATACCTTTCCAGG AGGAGAAGTCTTTAATAGTAGTGAGTTAAAAATTGCAGATGCCA CGATTCGAGATTGGGACGTTAATGAAGGATTGACTGGTGGCAG AATGATGACTTTTTCTCAAGGTTTTGCACACTCAAGTAACGTTG GGATGACCCTCCTTGAGCAAAAGATGGGAGATGCTACCTGGCT TGATTATCTTAATCGTTTTAAATTTGGTGTTCCGACCCGTTTCG GTTTGACGGATGAGTATGCTGGTCAGCTTCCTGCGGATAATATT GTCAACATTGCGCAAAGCTCATTTGGACAAGGGATTTCAGTGA CCCAGACGCAAATGATTCGTGCCTTTACAGCTATTGCTAATGAC GGTGTCATGCTGGAGCCTAAATTTATTAGTGCCATTTATGATCC AAATGATCAAACTGCTCGGAAATCTCAAAAAGAAATTGTGGGAA ATCCTGTTTCTAAAGATGCAGCTAGTCTAACTCGGACTAACATG GTTTTGGTAGGGACGGATCCGGTTTATGGAACCATGTATAACCA CAGCACAGGCAAGCCAACTGTAACTGTTCCTGGGCAAAATGTA GCCCTCAAGTCTGGTACGGCTCAGATTGCTGACGAGAAAAATG GTGGTTATCTAGTCGGGTTAACCGACTATATTTTCTCGGCTGTA TCGATGAGTCCGGCTGAAAATCCTGATTTTATCTTGTATGTGAC GGTCCAACAACCTGAACATTATTCAGGTATTCAGTTGGGAGAAT TTGCCAATCCTATCTTGGAGCGGGCTTCAGCTATGAAAGACTCT CTCAATCTTCAAACAACAGCTAAAGCTTTGGAGCAAGTAAGTCA ACAAAGTCCTTATCCTATGCCTAGTGTCAAGGATATTTCACCTG GTGATTTAGCAGAAGAATTGCGTCGCAATCTTGTACAACCCATC GTTGTGGGAACAGGAACGAAGATTAAAAACAGTTCTGCTGAAG AAGGGAAGAATCTTGCCCCGAATCAGCAAGTCCTTATCTTATCT GATAAAGCAGAGGAGGTTCCAGATATGTATGGTTGGACAAAGG AGACTGCTGAGACCCTTGCTAAGTGGCTCAATATAGAACTTGAA TTTCAAGGCTCGGGCTCTACTGTGCAGAAGCAAGATGTTCGTG CTAACACAGCTATCAAGGACATTAAAAAAATTACATTAACTTTAG GAGAC ......