交叉引物等温扩增-核酸试纸条技术检测蜡样芽孢杆菌
条带,1材料与方法,1试验材料,2试验方法,2结果与分析,1蜡样芽孢杆菌gyrB基因片段阳性克隆质粒的构建与验证,2CPA扩增反应体系的优化结果,3讨论
□ 刘 敏 莱芜检验检疫局蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是比较常见的引发食源性疾病的病原菌[1]。目前,用于蜡样芽抱杆菌的检测方法有常规平板培养筛选法、PCR、酶反应法、免疫学技术等。近年发展起来的交叉引物等温扩增技术(Cross Priming Amplification,CPA)对仪器设备的要求低[2]。本文拟结合交叉引物等温扩增技术和核酸试纸条技术,建立一种高灵敏、高通量、特异性好、操作简捷的蜡样芽胞杆菌快速检测方法。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 菌种与试剂
蜡样芽孢杆菌(ATCC7064)、沙门氏菌(ATCC14028)、大肠埃希氏菌(ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)和志贺氏菌(ATCC12022)均为莱芜检验检疫局技术中心冻存菌株。甜菜碱、MgS04购自Sigma公司,DNA Ladder Marker、BstDNA聚 合 酶、dNTPs、10×PCR Buffer、10×loading Buffer、rTaq DNA 和DNA快速提取试剂盒购自TaKaRa公司 ......
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