□ 刘新梅 程逸宇 吴海晶 任 敏 冯秋实 杨 军 南京市食品药品监督检验院

    蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是一种常见的兼性需氧革兰氏阳性致病菌，极易污染乳制品、米饭、水果制品等食品[1]。目前，检测方法主要是传统培养法，耗时费力，难以适应现代食品生产的检验需要。

    蜡样芽孢杆菌实时荧光PCR技术因具有检测时间短、操作简便等优点得到广泛运用。蜡样芽孢杆菌在食品中多以芽孢形态存在，常规DNA提取方法很难从蜡样芽孢杆菌芽孢中提取高质量DNA，对PCR检测的灵敏度造成一定的影响。为提高蜡样芽孢杆菌芽孢DNA提取率，增加实时荧光PCR检测灵敏度，本文采用液氮研磨法等方法进行试验，找出适合的提取方法。

    qPCR法检测蜡样芽孢杆菌还有一定的局限性，即不能区分检测到的DNA来自于死细胞还是活细胞，这造成qPCR检测法相对于传统分离培养方法存在假阳性情况。为解决这一问题，相继开发出mRNA检测法、免疫法等活菌检测方法，但都存在着各方面不足[2]。叠氮溴化乙锭(EMA)是一种DNA 插入型染料，能够透过细菌破损的细胞膜与DNA相交联，抑制PCR反应的进行。EMA与PCR相结合，可以精确地检测样品中活菌的存在[3]。本文将EMA运用到蜡样芽孢杆菌实时荧光PCR检测中，提高qPCR检测的准确度，降低假阳性率。

    1 材料和方法

    1.1 菌种

    蜡样芽孢杆菌CMCC(B)63301。

    1.2 仪器设备

    ABI 7500FAST实时荧光PCR仪、生物安全柜、超声波细胞破碎仪、显微镜。

    1.3 蜡样芽孢杆菌芽孢的制备

    蜡样芽孢杆菌芽孢形成可以通过营养限量进行诱导 ......