卢 瑛

    (莱芜职业技术学院，山东莱芜 271100)

    生姜蛋白酶(Ginger protease/Zingibain,EC 3.4.22.67)是存在于生姜块状根茎中的一种巯基蛋白酶，有两种GP-I 和GP-II(GPI 和GPII 分别与GenBank 中GP3 和GP2 同源性较高)，均含有221 个氨基酸，含有6 个Cys 形成3 个二硫键为糖蛋白，具有蛋白水解活性。生姜蛋白酶能够水解胶原蛋白，可用于肉类嫩化、酒类澄清，乳制品凝固等[1]，以姜汁为添加剂开发的具有新型保健功能的凝固型酸奶，在广东地区颇受欢迎，因此该酶具有良好的工业化应用前景[2]。

    生姜蛋白酶的分离纯化工艺操作复杂，而且生姜蛋白酶的含量在不同生姜品种、不同栽培地区及不同气候条件下差异非常大，甚至同一品种的干姜与生姜之间的含量也不相同，导致生姜蛋白酶的提取率不稳定[3]。尤其生姜常年连作导致茎腐病、斑点病和姜瘟病高发，推升了市场上生姜的价格，使得提取生姜蛋白酶的成本升高，进一步限制了生姜蛋白酶的开发利用。

    本实验从莱芜生姜中提取总RNA，通过RT-PCR 技术扩增生姜蛋白酶基因，并构建了pET-GPII 原核表达载体，重组质粒在大肠杆菌BL21 中实现了原核表达 ......