罗渺琴

    (广东东泰乳业有限公司公司，广东揭阳 515500)

    高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-串联质谱法均属于乳粉中维生素K1含量测定的常用方法，在大批量检测方面，本文研究的高效液相色谱法表现突出，其他两种方法测定成本较高，不适合开展大批量检测。但如果乳粉的基质较为复杂，高效液相色谱法可能无法满足检测需求，为保证高效液相色谱法更好服务于相关检测，本文围绕乳粉中维生素K1含量不确定度评定开展具体研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    氢氧化钾、脂肪酶、氯化锌、冰乙酸、正己烷、碳酸钾、无水乙酸钠、甲醇、四氢呋喃、无水乙醇和维生素K1标准品，其中甲醇、四氢呋喃均为色谱纯，无水乙酸钠、磷酸二氢钾分别为优级纯、分析纯，维生素K1标准品拥有99%以上纯度[1]。

    1.2 仪器与设备

    高效液相色谱仪、反相色谱柱，型号分别为U-3000、AQC18，反相色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

    1.3 实验方法

    1.3.1 样品前处理

    按照0.000 1 g精度称取乳粉样品2.0 g置入具塞三角瓶(150 mL)，加入纯水7 mL，温度控制在50 ℃，摇匀使乳粉样品充分溶解，之后将磷酸盐缓冲液加入其中并混匀，加入量为5 mL。加入脂肪酶0.2 g，充分混合后在恒温水浴振荡器中进行2 h振荡处理，温度设置为(37±2)℃，确保充分酶解。

    试样酶解好后分别加入碳酸钾1 g及无水乙醇10 mL，混合均匀后将水、正己烷各10 mL加入其中，振荡或涡旋提取10 min，离心5 min，速度设置为6 000 r/min，转移上清液至旋转蒸发瓶(100 mL)中，之后加入正己烷10 mL，重复操作，进一步向旋转蒸发瓶中转移上清液。旋蒸至近干，氮气吹干后加入甲醇5 mL并摇匀，通过0.22 μm滤膜进行过滤，滤液待进样

    1.3.2 色谱条件

    参考《食品安全国家标准 食品中维生素K1的测定》(GB 5009.158—2016)内容 ......