铜绿假单胞菌快速检测方法的优化研究
乙酰胺,琼脂,1材料与方法,1材料与仪器,2试验方法,3数据处理,2结果与分析,1不同选择培养基特异性比较,2人工模拟污染试验分析,3VITEK2Compact全自动细菌鉴定系统鉴定结果,4基质辅助激光电离解析飞行时间质普(
单 萌,周 婀,马 瑜(1.上海康识食品科技有限公司,上海 201101;2.陕西省微生物研究所,陕西西安 710043)
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),属假单胞菌属,广泛分布于水、土壤、空气、植物、污水、医院、动物及人体内等各类环境中,是一种常见的水源性和食源性条件致病菌[1-3]。该菌可引起机体组织器官病变甚至坏死,进而引起肠胃炎、败血症等病症及不同程度的人畜共患性传染病;同时,其产生的多种致病因子容易引起免疫力低下及受抑制人群或长期使用抗生素人群的化脓性感染和耐药性问题[4-5]。此外,铜绿假单胞菌形成生物膜后,对干燥、紫外线、消毒剂等理化因素及不良环境具有较强的抵抗力;且由该菌污染引起的产品腐败会严重影响产品品质,导致经济损失。因此,实现铜绿假单胞菌准确、快速检测一直是食品加工业的关注重点和迫切需求[6]。
利用培养基对微生物菌群中特定微生物具有选择性的这一特征,可以通过不同的选择性培养基从环境中对微生物进行分离。而关于铜绿假单胞菌的检测主要依赖于培养方法,其中最为关键的是选择合适的培养基。目前,已有多种选择性培养基,如抗生素筛选培养基[7]、色素筛选培养基[8]及乙酰胺培养基[9]可用于假单胞菌的分离筛选。我国关于铜绿假单胞菌的检测大多依据GB 7918.4—1987[10]和GB 8538—2016[11],此外,国标GB 19298—2014中明确规定各类抽检水样品中均不得检出铜绿假单胞菌[12]。但上述标准中的检测方法主要依赖于传统的分离培养、形态学观察及生化鉴定等检测手段,检测耗时长、过程烦琐、且容易出现假阳性或假阴性结果,不利于企业快速判断结果,进而造成检测结果滞后。因此,实现铜绿假单胞菌的快速、准确检测具有重要意义。
随着人们生活水平和对健康意识的不断提高,包装饮用水成为了许多家庭和集体饮用水的首选。近年来,随着包装饮用水的消费数量的不断上升、产品种类及包装方式的多元化,包装饮用水中检出铜绿假单胞菌的报道逐渐增多,原有的传统检测方法已难以满足当前的生产需求[13]。本研究同时对用于铜绿假单胞菌检测的4种不同培养基的筛选效力及选择性进行了评价,进而通过将选择性培养基鉴定结果与VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDITOF-MS)结合,对不同检测技术、方法的有效性、适用性及相互之间的融合性进行了比较和分析,以期提升铜绿假单胞菌的检测效率及准确度。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器 ......
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