杨光萍

    (贵州省检测技术研究应用中心，贵州贵阳 550014)

    近年来，食品种类的多元化发展离不开食品工业技术的不断提升，而食品安全问题也逐渐被广大消费者密切关注。根据各级市场监督管理部门所公布的食品抽检情况，食品微生物超标问题尤为凸显。其中，致病性微生物对人体感染所造成的危害是难以预估的，因此采用更为高效、合理的食品安全检测技术变得至关重要。目前，食品微生物检测主要根据GB 4789系列国家标准中规定的传统培养、分离及鉴定方法，但存在实验耗时长、步骤烦琐等问题，特别是对于处理食品安全突发事件来说存在困难。随着分子生物学实验技术的不断发展，高通量测序技术(High-Throughput Sequencing)在微生物群落结构、种类鉴定、功能分析等多个方面已有较多研究[1]。本文基于高通量测序技术的优势，总结并分析其在食品微生物检测中的应用和发展，以期为食品微生物检测技术的提升提供更多解决方案，促进检测技术的优化和升级。

    1 高通量测序技术

    Sanger等在20世纪70年代中期发明了DNA末端终止法测序技术，为生物遗传密码的解析提供了技术上的可能。1986年，第一台基因分析仪的面世标志着第一代测序技术时代的到来，自此，生物学研究进入了新的开端。但第一代测序平台实验耗时长、成本高、通量低，直到2005年第二代测序仪问世，使得大规模的基因组测序成为了可能[2]。目前，第三代测序仪平台也已经开始得到应用，但占据了高通量测序技术市场的还是第二代测序平台。

    高通量测序技术又称为下一代测序技术(Next-Generation Sequencing Technology，NGS)或是深度测序(Deep Sequencing)，其技术优势是能够一次性对上百万条DNA分子并行测序，并且检测结果更加准确、实验成本更低，在生物学相关领域得到广泛认可和应用[3]。第二代高通量测序技术主要包括454焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)、SOLiD测序技术(Supported Oligo Ligation Detetion)、连接酶测序技术和Solexa测序技术[4-5] ......