徐世航，郑 妍，岳松烨，朱琼瑶，赵 宇，边 鑫

    (哈尔滨商业大学，黑龙江哈尔滨 150028)

    甜酸茶是发源于中国北方的一种以小米和大豆等谷物为原料经自然发酵制成的饮品。甜酸茶的主要功能菌种是乳酸菌，大部分乳酸菌在人体内能发挥益生作用，促进人体健康[1-2]。因此，从甜酸茶中分离筛选乳酸菌，将有助于益生菌资源的开发。本文采用传统分离法从甜酸茶中得到乳酸菌，并对其进行分子生物学鉴定和生理生化鉴定，同时评价乳酸菌的安全性及胃肠道耐受能力。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    甜酸茶(市售)；MRS 液体培养基、琼脂、M17培养基、革兰氏染色试剂盒，黑龙江久丰生物公司；胃蛋白酶、胰蛋白酶、牛胆盐，西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司；无水乙醇、PBS 缓冲液等其他化学试剂均为分析纯。

    1.2 仪器与设备

    全自动高压灭菌锅，上海力申科学仪器有限公司；DL201 型恒温自动干燥箱，天津市实验仪器厂。

    1.3 试验方法

    1.3.1 甜酸茶中的乳酸菌分离

    将甜茶和酸茶样品用0.9%的生理盐水稀释10倍，将各自的溶液涂在固体MRS 平板上，在37 ℃下培养48 h。从平板上选择不同形态和大小的单个菌落，将其刮除并清洗数次，选择符合优势菌形态特征的菌落进行液体培养，并将其置于-80 ℃的甘油冷冻管中保存，以便进一步研究。

    1.3.2 乳酸菌的形态

    采用革兰氏染色试剂盒将分离后待检测的菌株置于载玻片上进行染色，在显微镜下观察菌株形态，根据形态判断菌株为革兰氏阳性菌(G+)或革兰氏阴性菌(G-)。

    1.3.3 生理生化鉴定

    将乳酸菌的菌液接种到不同培养基上，在无菌条件下进行培养，采用生理生化试剂盒对乳酸菌进行产过氧化氢酶、产硫化氢、葡萄糖产气、葡萄糖产酸、淀粉水解和糖发酵能力等生理生化鉴定 ......