程兢业，吴鸿亿，赵 力，王 婧

    (重庆三峡学院，重庆 404100)

    在我国，误食毒蘑菇而引发的中毒事件时有发生，毒蘑菇在进入食用和消化环节后难以用传统形态学方法辨认，近年来DNA 分子标记技术在真菌物种鉴别中发展迅速，而高质量基因组DNA 提取为其奠定了基础。目前国内外已有一些关于蘑菇基因组DNA 提取方法的报道，但由于蘑菇组织中含有大量的多糖、蛋白质和色素等物质，以及加工和消化过程中DNA 有所降解，导致后续相关分子实验受到影响[1-4]。因此，笔者在前人的研究基础上，采用试剂盒法和CTAB 法提取加工和消化后的蘑菇DNA，且对经典的CTAB 法进行改良，利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度和PCR 扩增检测DNA 质量，对提取方法、加工方式及消化对DNA 的影响进行初步的研究，同时也为毒蘑菇DNA 的提取提供参考。

    1 材料和方法

    1.1 试验材料

    食用菌杏鲍菇、香菇购于当地超市。

    CTAB 缓冲液(2% CTAB、100 mmol·L-1Tris-HCl、25 mmol·L-1EDTA、1.5 mol·L-1NaCl)；2-巯基乙醇；蛋白酶K(20 mg·mL-1)；RNase A；酚∶氯仿∶异戊醇(25 ∶24 ∶1)；氯仿∶异戊醇(24 ∶1)；胃蛋白酶；甲醇∶氯仿∶水(1.0 ∶2.0 ∶0.8)。

    1.2 试验方法

    1.2.1 加工方式

    加工方式采用炒、水煮、烘干和冻干的方法。①炒：平底锅烧热后倒入食用油将蘑菇炒至熟透。②水煮：水沸腾后放入蘑菇，分别在水中煮至5 min、10 min、15 min、30 min、45 min 和60 min。③烘干：将蘑菇切成薄片，60 ℃烘箱烘干6 ～7 h 备用。④冻干：将蘑菇切成薄片于-80 ℃冰箱放置一晚后真空冷冻干燥48 h，取出密封备用。以上样品均分为两份，一份消化实验备用，一份作为对照。

    1.2.2 消化试验

    人工胃液配制及消化处理参考GAUSTERER 等的试验[5]。

    1.2.3 DNA 提取

    本研究参照原有CTAB 法[6-7]，对其进行改良 ......